脳腫瘍における低酸素細胞の増殖能と糖およびアミノ酸代謝に関する研究

脑肿瘤缺氧细胞增殖能力及糖、氨基酸代谢研究

• 批准号: 09771028
• 负责人: 笹嶋 寿郎
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Akita University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09771028/
• 关键词: 脳腫瘍; 低酸素細胞; 増殖能; 糖代謝; アミノ酸代謝

今年度はラット可移植性腫瘍株(C6,RG2,W256)について10%FBS添加MEMを用いて単層培養し,SigmaScan Proで計測された任意の3視野内の細胞数に基づいて細胞密度を算出して細胞増殖曲線を作成し,細胞増殖期が定常期であることを確認した.細胞増殖期が定常期と判定された腫瘍細胞への各トレーサーの取り込みは培養液から細胞内へのトレーサーの流入を示す速度定数K_1と細胞内流入が測定時間内に平衡状態に達するトレーサーについては細胞内集積量を反映するVolume distribution(Vd)で評価した.10%FBS添加MEMを三重標識したアミノ酸欠乏10%FBS添加MEM(^<14>C標識チミジン,^<99m>Tc標識DTPA,^3H標識フルオロデオキシグルコース(^3H-FDG)あるいは^3H標識メチオニン)に交換し,5分から60分にわたって細胞と培養液を経時的に採取して細胞内および培養液中の各トレーサー濃度を液体シンチレーションカウンターで測定した.採取による障害細胞および細胞外腔へのトレーサーの集積は^<99m>Tc標識DTPAの集積を用いて補正し,真の細胞/培養液濃度比から速度定数K_1とVdを算出し,増殖能と糖代謝およびメチオニン集積の関連を解析した.^<14>C標識チミジンの集積速度(増殖能)はいずれの細胞株においても低酸素状態(2および5%酸素)で24時間目には常酸素細胞(20%酸素)の30%以下に低下し,5%酸素で6日間培養されたRG2とW256の増殖能は低値であったが,C6は常酸素細胞と同程度まで回復していた.^3H-FDGの集積速度(糖代謝)はいずれの細胞株でも5%酸素で4時間目に有意に増加し,C6とW256では24時間目に常酸素細胞と同程度まで低下したが,RG2では6日目でも増加していた.2%酸素ではいずれの細胞でも糖代謝は低下していた.メチオニン集積はいずれの酸素濃度下でもRG2とW256では4時間目に増加し,C6では変化がなかったが,5%酸素で6日目にはいずれの細胞でも増加した.慢性的低酸素状態(5%酸素)における低酸素負荷(2%酸素への変更)では増殖能と糖代謝はいずれの細胞でも有意に低下し,メチオニン集積もW256で低下したが,C6とRG2では有意に増加した.低酸素負荷によりいずれの腫瘍細胞も増殖能は低下したが,^3H-FDGおよびメチオニン集積の変化は細胞株により異なることが判明し,低酸素細胞における糖・アミノ酸代謝および膜輸送の変動が示唆された.

This year, transplantable tumor strains (C6, RG2,W256) were cultured in single layer with 10% FBS and MEM,SigmaScan Pro measured the number of cells in any three fields of view, calculated the cell density, and established the cell growth curve. Cell growth period, steady state period, determination of cell cycle, selection of culture medium, intracellular cycle, inflow rate, determination of K_1, intracellular inflow, determination of cell cycle equilibrium state, determination of cell cycle Volume distribution 10%FBS Add MEM Triple ID 10%FBS Add MEM(^<14>C,^<99m>Tc DTPA,^3H 5 minutes later, 60 minutes later, the cells and culture medium were collected, and the concentrations of various substances in the cells and culture medium were determined. The <99m>accumulation of DTPA in the cell culture medium was corrected by Tc, and the concentration ratio of DTPA in the cell culture medium was calculated. <14>C. The accumulation rate (growth rate) of C6 cells was lower than 30% of normal cells (20% acid) in 24 hours when cultured with RG2 and W256 cells in 5% acid. 3. The accumulation rate of H-FDG (glucose metabolism) was increased intentionally in all cell lines at 5% acid level for 4 days, decreased in all cell lines at 24 days for C6 and W256, increased at 6 days for RG2, and decreased in all cell lines at 2% acid level. The concentration of RG2 and W256 increased at 4 days,C6 increased at 5%, and the concentration of acid increased at 6 days. Chronic hypoacidosis (5% acidosis) causes hypoacidosis load (2% acidosis) to increase reproductive energy and glucose metabolism. The proliferation of tumor cells under low acid loading was reduced, and the changes in glucose and acid metabolism and membrane transport in low acid cells were identified.