筋特異的カルパイン欠損型筋ジストロフィー症の分子機構の解明

阐明肌肉特异性钙蛋白酶缺乏性肌营养不良症的分子机制

• 批准号: 09780564
• 负责人: 反町 洋之
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09780564/
• 关键词: カルパイン; 遺伝病; 骨格筋; システインプロテアーゼ; コネクチン; 筋原線維; カルシウム; 筋ジストロフィー

カルパインは、細胞質内に存在して他の細胞内タンパク質をCa^<2+>依存的にプロセシングすることにより制御するプロテアーゼである。その中の骨格筋特異的カルパインp94は、巨大筋弾性タンパク質.であるコネクチンと結合する。そこで本研究では、p94欠槓によって引き起こされる肢帯型筋ジストロフィー症(LGMD2A)の分子機構を、p94及qコネクチンの解析により明らかにしていくことを目的とした。平成9年度に行った、(1)培養細胞におけるp94の発現とその生理作用の解析、(2)酵母Two-Hybrid系を用いたp94結含タンパク質のスクリーニング、(3)p94の発現と細胞周期・細胞分化との関係の解析、に関して結果をまとめ、さらに以下の実験を行った。(4)p94の骨格筋からの精製とLGMD2A筋におけるp94の鹸析:p94の急速な自己消化のため、骨格筋からp94を検出したという報告は皆無である。そこで、コネクチンと結合するという知見を基にして、根本からp94の精製方法を再検討し、p94を捕捉することを試みた。さらに、LGMD2Aにおけるp94の役割を調べるため、患者骨格筋を用いて、免疫組識染色、ウェスタンブロット解析を行い、p94の局在や発現量変化を解析した。同時に、フォドリンのプロセシングが異常であることを明らかとした。(5)p94トランスジェニックマウスの解析:我々は既にp94の活性中心のcysをserに置換して不活性化した分子を過剰発現するようにしたトランスジェニックマウスを作成した。このマウスを用いて、p94の生理機能、p94の細胞内局在、骨格筋機能などの解析を行う。以上の結果を総合すると、p94は、LGMD2Aにおいて、その正常なプロテアーゼ活性が損なわれていることが強く示唆され、そのために細胞内情報伝達系に異常が生じて症状となっていることが予想された。

The existence of Ca^2+>-dependent proteins in the cytoplasm of the cells P94-P94-P9であるコネクチンと结合する。The molecular mechanism of LGMD2A was analyzed by means of p94 and qC analysis. (1) Analysis of the physiological function of p94 expression in cultured cells,(2) Analysis of the relationship between p94 expression and cell cycle and cell differentiation, and (3) Analysis of the relationship between p94 expression and cell differentiation. (4)p94 and LGMD2A tendon refinement and analysis:p94 and rapid digestion and p94 detection report are not available. The method of refining p94 is discussed again, and p94 is captured. In addition, LGMD2A was detected by p94 gene expression, and the expression of p94 gene was analyzed by immunohistochemical staining. At the same time, the number of people in the village is different from that in the village. (5) Analysis of p94 active center: We will replace the active center of p94 with the inactive one. P94 physiological function, p94 intracellular localization, bone and tendon function analysis The above results are summarized as follows: LGMD2A, LGMD2A, LGMD

项目成果

Sorimachi,Hiroyuki: "Molecular cloning and characterization of cDNAs for the μ-type large subunit (μCL)and the small subunit(30K)of chicken calpain." Comp.Biochem.Physiol.(Part B). 118. 539-547 (1997)

Sorimachi, Hiroyuki：“鸡钙蛋白酶 μ 型大亚基 (μCL) 和小亚基 (30K) cDNA 的分子克隆和表征。”Comp.Biochem.Physiol.（B 部分）。 1997）

Sorimachi,Hiroyuki: "Functional defects of a muscle-specific calpain,p94,caused by mutations associated with limb-girdle muscular dystrophy type 2A (LGMD2A)" J.Biol.Chem.273. 17073-17078 (1998)

Sorimachi、Hiroyuki：“肌肉特异性钙蛋白酶 p94 的功能缺陷，由与 2A 型肢带型肌营养不良症 (LGMD2A) 相关的突变引起”J.Biol.Chem.273。

Sorimachi,Hiroyuki: "A novel aspect of calpain activation." FEBS Lett.433. 1-4 (1998)

Sorimachi，Hiroyuki：“钙蛋白酶激活的一个新方面。”

Sorimachi,Hiroyuki: "Molecular cloning and characterization of a novel tissue-specific calpain predominantly expressed in the digestive tract." Biol.Chem.379(印刷中). (1998)

Sorimachi, Hiroyuki：“主要在消化道中表达的新型组织特异性钙蛋白酶的分子克隆和表征。”Biol.Chem.379（出版中）。

Sorimachi,Hiroyuki: "Expanded CTG repeats in myotonin protein kinase suppresses myogenic differentiation." NeuroRepoert. 8. 3749-3753 (1997)

Sorimachi,Hiroyuki：“肌强直蛋白激酶中扩展的 CTG 重复序列可抑制肌原性分化。”