組織特異的カルパインの検索・分析によるカルパインファミリーの機能解析

通过搜索和分析组织特异性钙蛋白酶对钙蛋白酶家族进行功能分析

• 批准号: 06780480
• 负责人: 反町 洋之
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06780480/
• 关键词: カルパイン; 組織特異的発現; 骨格筋; システインプロテアーゼ; カルシウム; alternative splicing; 胃; 遺伝子発現

カルパインは細胞質内のCa^<2+>依存性プロテアーゼであり、細胞機能のモジュレーターとして働くと考えられている。構造解析は大きく先行し、特に哺乳類カルパインの構造は完全に解明されたかに見えた。Ca^<2+>依存性の異なるアイソザイム、μ-及びm-カルパインが存在し、どちらも組織普遍的発現を示すため、細胞の基本的機能を果たすと考えられる。これに対し、最近我々は組織特異的に発現する分子種、骨格筋特異的なp94と胃特異的なnCL-2,-2'を発見し、カルパインが組織特異的及び普遍的分子種に分類され、その構造の全貌については未だ途上にある事を見い出し、今までのカルパインについての概念を大きく変換する必要のあることを明らかにした。そこで本研究は、遺伝子、タンパク質、培養細胞レベルで、広くスクリーニングし、カルパインファミリーの構造と分布を解明することを目的とした。まず、nCL-2のcDNAをプローブに用いて、種々の臓器cDNAライブラリーをスクリーニングした結果、カルパインファミリーの新しいメンバーを発見しnCL-3と命名した。一方、骨格筋においてp94タンパク質は、自己消化のために非常に少量しか存在しないので、培養細胞(COS,L8,P19細胞など)に発現させ、様々な抗体を用いて確認した。その結果p94の特異的な構造と発現レベル、分解速度に関係があることが明らかとなった。また、免疫組織染色により局在を解析した結果、ラット骨格筋では核膜上に存在する可能性が示唆された。nCL-2,-2'については、その発現量比が、発生段階などで変化する可能性もあるため、RT-PCRを用いてこれを検証した結果、両者で組織分布が異なることを見い出した。今後これらの結果を総合し、さらに研究を進めて組織特異的及び普遍的発現の意義や、その機能分担を明らかにしたい。

This is due to the fact that there is a significant increase in the amount of calcium in the cell. The cell is dependent on lt;2+>. The cell is responsible for the cell temperature. It is necessary to make a complete understanding of the problems of large and special mammalian animals in advance. CA ^ & lt;2+> dependencies are known to exist in various systems, such as μ -, m -, and m -, to show that they are common in the organization, and to test the basic mechanical properties of the cells. In recent years, we have identified some molecular species specially designed by our organization, and we have identified p94 stomach specific nCL-2 in bone lattices. -2's information, information, organization, and general molecular classification, information, information and information. The purpose of this study is to understand the distribution of the data in this study. For example, the nCL-2 cDNA system is used, the cDNA device is used to compare the results of the test results, and the new information is available in the nCL-3 code. On the one hand, the bone tendons were isolated from p94 cells, and they were digested by themselves. Very few cells were found, COS,L8,P19 cells were cultured, and antibodies were confirmed. The results show that the temperature of the p94 special device is higher than that of the control group, and the speed of decomposition is different. There is a possibility of instigation on the nuclear membrane of bone lattice tendons in the analysis of the results of immune tissue staining and immuno-tissue staining. The results of the nCL-2,-2' test, the comparison of the volume of data, the possibility of health, the results of the results of the RT-PCR, and the distribution of the organization. In the future, the results show that the research will improve the organization's special and general meaning of realization, and that the mechanism will be able to share the information.

项目成果

Sorimachi,Hiroyuki: "Identification of a third ubiquitous calpain species.-Chicken muscle expresses four distinct calpains." Biochem.Biophys.Acta. (in press). (1995)

Sorimachi，Hiroyuki：“第三种普遍存在的钙蛋白酶种类的鉴定。鸡肌肉表达四种不同的钙蛋白酶。”

Sorimachi,Hiroyuki: "Calpain dissociates into subunits in the presence of calcium ions." Biochem.Biophys.Res.Commun.(in press). (1995)

Sorimachi，Hiroyuki：“钙蛋白酶在钙离子存在的情况下解离成亚基。”

Sorimachi,Hiroyuki: "New era of calpain research:Discovery of tissue-specific calpains." FEBS Lett.343. 1-5 (1994)

Sorimachi，Hiroyuki：“钙蛋白酶研究的新时代：组织特异性钙蛋白酶的发现。”

Sorimachi,Hiroyuki: "A catalytic subunit of calpain possesses full proteolytic activity." FEBS Lett.(in press). (1995)

Sorimachi,Hiroyuki：“钙蛋白酶的催化亚基具有完整的蛋白水解活性。”

Sorimachi,Hiroyuki: "Calpains:New discoveries in molecular diversity and physiological-pathological involvement of the calcium-dependent proteases." FASEB J.8. 814-822 (1994)

Sorimachi，Hiroyuki：“钙蛋白酶：钙依赖性蛋白酶分子多样性和生理病理学参与的新发现。”