原田病ぶどう膜炎眼局所由来HLA-DR4拘束性メラノサイト抗原特異的T細胞の解析
原田病葡萄膜炎眼科来源的 HLA-DR4 限制性黑素细胞抗原特异性 T 细胞分析
基本信息
- 批准号:10770966
- 负责人:
- 金额:$ 1.15万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
- 财政年份:1998
- 资助国家:日本
- 起止时间:1998 至 1999
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
眼内に活動性病変のあるHLA-DR4(DRB1^*0405)陽性原田病患者数名の眼局所浸出細胞、脳脊髄液内浸出細胞及び末梢血単核球(PBMC)を採取して、rIL-2,feeder細胞(X線照射した混合健常人末梢血単核球)存在下に限界希釈法を用いてT細胞クローン(TCC)を樹立した。樹立したTCCのphenotype解析はフローサイトメトリーにて行い、CD3+CD4+のTCCを以下のassayに用いた。同原田病患者のPBMCにB95-8培養上清を加え、EB virus transfomed B cell lineを樹立した。また、抗原提示細胞としてこの自己B細胞株およびHLA-DR4(DRB1^*0405)陽性のL-DR4(a mouse trasfected L fibroblast cells)を用い、メラノイト細胞株のHLA-DR4(DRB1^*0405)陽性株および陰性株も標的細胞として用いた。抗原ペプチドとしてはメラノサイト抗原遺伝子の一つ、Tyrosinaseから同定されたHLA-DR4 binding peptide(Ty450-462;SYLQDSDPDSFQD)を合成した。陽性コントロールペプチドとしてDR4 bindingのApolipoprotein B(AP-B-100;KPYNEAKTKFDKY)を、陰性ペプチドとしてDR1bindingのインフルエンザヘマグルチニンペプチド(HA306-318;PKYVKQNTLKLAT)をを合成し、用いた。まず、樹立したTCCのサイトカイン産生能をELISA法により検討した。測定したサイトカインはIL-1a,IL-2,IL-4,IL-6,IL-10,TNF-a,IFN-g,GM-CSF,及びIL-8,RANTES,MIP-1a,bなどのケモカインで無刺激下でのCD4+TCCのこれらの産生能を測定した。これらのTCCはIL-6,IFN-g,IL-8,RANTES,MIP-1a,bなどが対照(健常人末梢血単核球由来TCC)と比べ有意に高値を示した。次にこれらのTCCを用いてTy450-462に反応するクローンがあるかどうかを検討した。標的細胞にL-DR4を用い、assayはTCCのRANTES産生能(24,48,72時間)でスクリーニングしたところ原田病眼局所およびPBMC由来のCD4陽性TCCの中の数クローンがTy450-462peptideに反応した。今後さらにクローンを増やしてスクリーニングを行う予定である。
In the presence of HLA-DR4 (DRB1^*0405)-positive ocular active disease, ocular leached cells, spinal fluid leached cells, and peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were collected from several patients with Harada disease, and rIL-2,feeder cells (X-ray irradiated mixed healthy human peripheral blood mononuclear cells) were used to establish TCC in the limiting cell method. TCC phenotype-based analysis of CD3 + CD4 + PBMC B95 -8 culture supernatant from patients with Harada disease was added and EB virus transfected B cell line was established. Antigen was used to indicate the presence of HLA-DR4 (DRB1^*0405)-positive L-DR4 (a mouse transfected L fibroblast cells) in B cell lines, HLA-DR4 (DRB1^* 0405)-positive cells in B cell lines, and HLA-DR4 (DRB1^*0405)-negative cells in B cell lines. Antigen selection and Tyrosinase synthesis of HLA-DR4 binding peptide(Ty450-462;SYLQDSDPDSFQD). A combination of positive and negative DR4 binding proteins (AP-B-100;KPYNEAKTKFDKY) and DR4 binding proteins (HA306-318; PKYVKNTLKLAT). The TCC was established by ELISA. IL-1a,IL-2,IL-4,IL-6,IL-10,TNF-a,IFN-g,GM-CSF, and IL-8,RANTES,MIP-1a,b were measured. TCC IL-6,IFN-g,IL-8,RANTES,MIP-1a,b are higher than TCC. The second is to use Ty450-462 as a reference point. The target cell L-DR4 was used, assay TCC RANTES production ability (24, 48, 72 hours), and the number of CD4-positive TCC derived from PBMC was Ty450-462peptide. From now on, you will be able to increase your salary.
项目成果
期刊论文数量(1)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Mami Sakaguchi: "Cytokine production by T cells infiltrating in the eye of uveitis patients" Japanese Journal of Ophthalmology. 42・4. 262-268 (1998)
Mami Sakaguchi:“葡萄膜炎患者眼睛中 T 细胞浸润产生的细胞因子”,日本眼科杂志 42・4(1998 年)。
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