HLA-DR4拘束性タイロシネースメラノサイト抗原特異的原田病眼局所T細胞の解析

原田病眼中 HLA-DR4 限制性泰乐胺酶黑素细胞抗原特异性局部 T 细胞分析

• 批准号: 13771015
• 负责人: 杉田 直
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13771015/
• 关键词: 原田病; T細胞クローン; HLA-DR4; メラノサイト関連抗原; ぶどう膜炎

1)T細胞クローンの用意:我々は以前よりぶどう膜炎の活動性病変のあるHLA-DR4(DRB1^*0405)陽性原田病患者数名の眼局所浸出細胞、脳脊髄液内浸出細胞及び末梢血単核球(PBMC)を採取して、rIL-2、feeder細胞存在下に限界希釈法を用いてT細胞クローンを樹立していた。今回、主にその中のCD4陽性T細胞クローンを中心にスクリーニングを行った。このコントロール細胞にベーチェット病とサルコイドーシスHLA-DR4陽性患者のT細胞クローンを用い、HLA-DR4陽性健常人PBMCからも同様に樹立し、検討を行った。2)標的細胞の用意:Target cellとしてHLA-DR4(DRB1^*0405)transfectantのL-DR4細胞株を用いて、これらを抗原提示細胞として自己のPBMCと共に用いた。3)抗原の用意:tyrosinase peptide(450-462; SYLQDSDPDSFQD、gp100peptide(44-59;WNRQLYPEWTEAQRLD)の二つのメラノサイト関連抗原を用いてスクリーニングした。陰性ペプチドとしてHA peptide(307-318; PKYVKQNTLKLAT)を用いた。4)サイトカインassay:樹立した原田病CD4陽性T細胞クローンのRANTES産生能をELISAにて測定する事でスクリーニングを行ったところ、assayしたT細胞クローンの数クローンがtyrosinase peptide、gp100peptideに対してHLA-DR4(DBR1^*0405)拘束性に反応しRANTES産生能の増加を認めた(20クローン中、7クローン)。これは原田病に特異的で、HLA-DR4陽性ベーチェット病、サルコイドーシス眼局所由来T細胞、健常人PBMC由来T細胞には全く認められなかった。

1) Purpose of T cell culture: We used HLA-DR4 (DRB1^*0405)-positive Harada disease to establish T cell culture in the presence of rIL-2 and feeder cells from several ocular extracts, spinal fluid extracts and peripheral blood mononuclear cells (PBMC). CD4-positive T cells in the center of the cell line The T cells of HLA-DR4-positive patients and PBMCs of HLA-DR4-positive healthy people were used in the same way. 2)Target cells:Target cells and HLA-DR4 (DRB1^*0405) transfected L-DR4 cell lines. Antigen prompt cells and their PBMCs. 3)Antigens: tyrosine peptide(450-462; SYLQDSDPDSFQD, gp100peptide(44-59;WNRQLYPEWTEAQRLD) and two related antigens. Yin selection of the HA peptide(307-318; PKYVKQNTLKLAT) is used. 4) The RANTES production activity of CD4 positive T cells in HLA-DR4 (DBR1^*0405) was determined by ELISA. The activity of RANTES production activity of CD4 positive T cells in HLA-DR4 (DBR1^*0405) was determined by ELISA. HLA-DR4-positive T cells derived from Harada disease and PBMC derived from healthy individuals