聴覚障害モデルマウスを用いた内耳有毛細胞におけるキネシン様蛋白質の機能解析

使用聋模型小鼠对内耳毛细胞中的驱动蛋白样蛋白进行功能分析

• 批准号: 11771030
• 负责人: 吉川 欣亮
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11771030/
• 关键词: キネシン; 内耳有毛細胞; Jackson shakerマウス; Shaker-1マウス; ミオシンVIIa; ミオシン-キネシン相互作用; ジャクソンシェーカーマウス; shaker-1マウス

マウスを用いて内耳有毛細胞で機能することが予想される新規のモーター蛋白質であるキネシン様蛋白質(DAK:Deafness associated kinesin)の解析を行った結果、以下に示すような知見が得られた。DAKのアミノ酸配列をもとに合成したペプチドを用いて新たに2種の抗ペプチド抗体を作製し、これを用いて、採取したマウス内耳蝸牛管およびその組織切片の免疫染色を行った。その結果、内有毛および外有毛細胞さらに外柱細胞に強く発現が認められ、さらに蝸牛神経細胞にも発現が認められた。一方、DAKの突然変異による聴覚障害が予想されるJackson shaker(js)マウスにおいても同様の解析を試みた結果、その発現は明らかに低下しており、特に有毛細胞においては発現がほとんど認められなかった。さらに、ミオシンVIIaの異常により聴覚障害を引き起こすShaker-1(sh1)マウスにおいてもその発現は低下していた。また、ミオシンVIIa間の相互作用を検討するため、ミオシンVIIaに対する抗体を用いて、抗体カラムを作製し、ホモジネートから精製した抗原蛋白質に対するウェスタンブロッティングを行ったところ、DAK由来のバンドが検出されたことから、両者の相互作用が示唆された。また、内耳におけるDAKとミオシンVIIaの相互作用を個体レベルで検討するため、jsマウスとsh1マウスを交配し、2重変異マウスの作製を試み、現在までに両者の合成異型接合体を作製することができた。このマウスの表現型を解析した結果、行動においては両者のホモ個体で認められるような異常は確認できなかった。また、ABR(Auditory brainstem response)により聴力を測定した結果においても3ヶ月齢までは正常な閾値を示しており、内耳の形態学的異常は認められなかった。

マ ウ ス を with い て function of inner ear hair cells have で す る こ と が to think さ れ る new rules の モ ー タ ー protein で あ る キ ネ シ ン others in protein (DAK: Deafness associated kinesin) line analytical を の っ た results, the following に す よ う な knowledge が must ら れ た. DAK の ア ミ ノ acid with column を も と に synthetic し た ペ プ チ ド を with い て new た に two の resistance ペ プ チ ド し, the antibody を cropping こ れ を with い て, take し た マ ウ ス inner ear snail お よ び そ の biopsy の immune dyeing line を っ た.​ Party, DAK の suddenly - different に よ る hearing handicap of が to think さ れ る Jackson shaker (js) マ ウ ス に お い て も with others in analytical を の try み た results, そ の 発 now は Ming ら か に low し て お り, に has clusters に お い て は 発 now が ほ と ん ど recognize め ら れ な か っ た. さ ら に, ミ オ シ ン VIIa の abnormal に よ り hearing handicap of を lead き up こ す Shaker - 1 (sh1) マ ウ ス に お い て も そ の 発 now low は し て い た. ま た, ミ オ シ ン の interaction between VIIa を beg す 検 る た め, ミ オ シ ン VIIa に す seaborne を る antibody with い て, antibody カ ラ ム を as し, ホ モ ジ ネ ー ト か ら refined し た antigen protein に す seaborne る ウ ェ ス タ ン ブ ロ ッ テ ィ ン グ を line っ た と こ ろ, DAK origin の バ ン ド が 検 out さ れ た こ と か ら, struck の each other The function of が indicates された. ま た, inner ear に お け る DAK と ミ オ シ ン VIIa の を interaction between individual レ ベ ル で す 検 please る た め, js マ ウ ス と sh1 マ ウ ス を し mating, 2 - different マ ウ ス を み, now the の cropping ま で に struck is の synthetic heterozygote を cropping す る こ と が で き た. こ の マ ウ ス の phenotype を parsing し た results, action に お い て は struck is の ホ モ individual で recognize め ら れ る よ う な abnormal は confirm で き な か っ た. ま た, ABR (Auditory brainstem response) に よ り を 聴 force measurement し た results に お い て も ヶ 3 months 齢 ま で は normal な threshold numerical を shown し て お り, inner ear の morphological abnormalities は め ら れ な か っ た.

项目成果

Sekine,M.,Taya C.,Kikkawa,Y.,Yonekawa,Y. et al.: "Regulation of mouse kidney tubular epitherial cell-specific expression of core 2 GlcNAc transferase"Eur.J.Biochem.,. (in press).

关根，M.，Taya C.，吉川，Y.，米川，Y.

Kikkawa,Y.,Miura I.,Takahama S.,Wakana,S. et al: "Microsatellite Database for MSM/Ms and JF1/Ms, molossinus-derived inbred strains"Mammalian Genome.,. (in press).

吉川，Y.，三浦 I.，高滨 S.，若菜，S.