糖脂質の糖鎖に多様性を生み出す糖転移酵素遺伝子のクローニングと機能解析
糖脂糖链多样性糖基转移酶基因的克隆和功能分析
基本信息
- 批准号:11780437
- 负责人:
- 金额:$ 1.54万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
- 财政年份:2000
- 资助国家:日本
- 起止时间:2000 至 2001
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
糖転位酵素ホモログLARGEは2型膜蛋白質で、N末側にUDP-グルコース:糖タンパク質グルコース転移酵素(UGGT)、C末側にβ1,3-N-アセチルグルコサミン転移酵素(iGnT)とホモロジーを有する特徴的な構造をしている。UDP-グルコース:糖タンパク質グルコース転移酵素(UGGT)は糖蛋白質のフォールディングセンサーとしてER品質管理機構に関与するし、再グルコース化された糖蛋白質はER分子シャペロンであるカルネキシン/カルレティキュリンと結合することにより、フォールディングが完了するまでER内に滞留させる働きをしている(カルネキシンサイクル)。本年度はUGGTとホモロジーを有するLARGE蛋白質がカルネキシンサイクルに関与するを調べる目的で、LARGE蛋白質とカルネキシン/カルレティキュリンとの相互作用について検討した。FLAG-tagged LARGE遺伝子をCOS-7細胞に強制発現させて、anti-FLAG抗体を用いた蛍光抗体染色によりLARGE蛋白質の細胞内局在を検討したところ、小胞体(ER)特異的な染色パターンを示し、またERマーカーのカルネキシン、およびカルレティキュリンとco-localizeすることが判明した。さらに、LARGE蛋白質はEndo Hに対して感受性を持つことより、ER局在蛋白質である可能性が示唆された。293細胞を用いた安定発現系でFLAG-tagged LARGE蛋白質を発現させて、anti-Calreticulin,およびanti-Calnexin抗体で免疫沈降を行うと、LARGE蛋白質が特異的に共沈することを見い出した。また、他のER分子シャペロンのPDI,ERp58,およびBiPに対する抗体で免疫沈降してもLARGE蛋白質は共沈されなかった。LARGE蛋白質とCalreticulin,およびCalnexinとの共沈はグルコシダーゼ阻害剤のcastanospermine(CST)およびtunicamycin(TU)で処理を行っても阻害されなかったことから、蛋白-蛋白相互作用による複合体形成が示唆された。GST-LARGE融合蛋白と^<125>I-CRを用いた結合実験から、in vitroにおいてもLARGE蛋白質とCalreticulinとの特異的結合が観察された。また、Calreticulinとの結合にはLARGE蛋白質のUGGTドメインが必要であることが示唆された。
Glycoside enzyme LARGE is a type 2 membrane protein, UDP-linked protein on the N terminal side: Glycoside enzyme (UGGT), β1,3-N-linked enzyme (iGnT) on the C terminal side. UDP-C: Glycoprotein protein transfer enzyme (UGGT) Glycoprotein transfer enzyme (UGGT) This year's large-scale research on the interaction of large-scale proteins with large numbers of organisms FLAG-tagged LARGE protein was detected in COS-7 cells under stress, and anti-FLAG antibodies were used to detect the intracellular localization of LARGE protein by light antibody staining. ER specific staining was used to detect the expression of LARGE protein in COS-7 cells. In addition, LARGE protein has the ability to express itself in the protein domain. 293 cells were used in the stable development system, FLAG-tagged LARGE protein development, anti-Calretinin, anti-Calnexin antibody immune sedimentation, LARGE protein specific co-precipitation. Other ER molecules include PDI, ERP58, and BiP. LARGE protein and Calretinin, Calnexin and co-precipitation of Castanospermine(CST) and Tunicin (TU) are involved in complex formation and protein-protein interaction. GST-LARGE fusion protein and <125>I-CR binding in vitro and specific binding to LARGE protein and Calretinin The binding of calretinol to LARGE protein is essential.
项目成果
期刊论文数量(14)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Yoshiakira Kanai: "Identification of a stromal cell type characterized by the secretion of a soluble integrin-binding protein, MFG-E8, in mouse early"Mechanisms of Development. 96・2. 223-227 (2000)
Yoshiakira Kanai:“小鼠早期以可溶性整合素结合蛋白 MFG-E8 的分泌为特征的基质细胞类型的鉴定”96・2(2000)。
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- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Holger Kissel: "Point mutation in Kit receptor tyrosine kinase reveals essential roles for Kit signaling in spermatogenesis and oogenesis without"EMBO J.. 19・6 (in press). (2000)
Holger Kissel:“Kit 受体酪氨酸激酶的点突变揭示了 Kit 信号在精子发生和卵子发生中的重要作用,而无需”EMBO J.. 19・6(印刷中)。
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Yasushi Shimoda: "Cloning and Expression of a Novel Galactoside β1, 3-Glucruronyltransferase Involved in the Biosynthesis of HNK-1"J. Biol. Chem.. 274・24. 17115-17122 (1999)
下田靖:“参与 HNK-1 生物合成的新型半乳糖苷 β1、3-葡萄糖醛酸转移酶的克隆和表达”J. Biol. 17115-17122。
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- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Gary S.Goldberg: "Connexicin43 suppresses MFG-E8 while induction contact growth inhibition of glioma."Cancer Research. 60・21. 6018-26 (2000)
Gary S.Goldberg:“Connexicin43 抑制 MFG-E8,同时诱导神经胶质瘤的接触生长抑制。”癌症研究 60・21(2000)。
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- 发表时间:
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- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Taka Osanai: "Expression of glycoconjugates bearing the Lewis X epitope during neural differentiation of P19 EC cells."FEBS Lett. 488・1-2. 23-28 (2001)
Taka Osanai:“P19 EC 细胞神经分化过程中带有 Lewis X 表位的糖缀合物的表达”。FEBS Lett。488・1-2(2001)。
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- 作者:
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山田 陽子;石川 雄一郎;槙坂 典子;田島 陽一;桜庭 均;芝崎 太 - 通讯作者:
芝崎 太
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