カルネキシンおよびカルレティキュリンのノックアウトマウス作製とその機能解析

钙联蛋白和钙网蛋白基因敲除小鼠的产生及其功能分析

• 批准号: 15032230
• 负责人: 伊川 正人
• 金额: $ 4.8万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15032230/
• 关键词: カルネキシン; カルレティキュリン; ノックアウト; コンディショナル; cre; loxPシステム; カルメジン; 精巣; 受精

カルネキシンおよびカルレティキュリンは細胞の小胞体に局在し、膜・分泌蛋白質が成熟する過程でその品質管理に重要なレクチンシャペロンとして機能する。しかしいずれも体細胞に普遍的に発現するために、ノックアウトマウスを作製すると胚性致死もしくは生まれても発育不全のために成熟個体での機能解析を行うことは不可能であることが報告されている。そこで我々はcre/loxPシステムを用いることにより、これらのシャペロンを任意の組織や細胞・時期特異的(コンディショナル)に欠損するマウスを作製し、成熟個体でその機能解析を行うことを計画した。これまでにカルネキシンのコンディショナルノックアウトマウスのベクターを作製し、ES細胞に導入することにより、相同組換え体を得た。それらのES細胞をB6マウスの胚盤胞に注入してキメラマウスを作製し、B6マウスとの交配により生殖系列への寄与を確認した。次にCAG-creマウスとの交配により、全身でカルネキシンを欠損させた場合には、既報通りホモ欠損個体は成長不全のために殆ど成育せず、精子受精能の検討ができないことを確認した。さらに精原細胞特異的にcreリコンビナーゼを発現するトランスジェニックマウスと交配させた結果、精細胞特異的にカルネキシンを欠損するマウスを作製することに成功した。並行して行っているカルレティキュリンについても、キメラマウスの作製に成功し、B6マウスと交配からカルレティキュリンのコンディショナルノックアウトマウスの作製に成功している。

カ ル ネ キ シ ン お よ び カ ル レ テ ィ キ ュ リ ン は cell の small cell body に bureau in し, membrane secreted protein が mature す る process で そ の quality management important な に レ ク チ ン シ ャ ペ ロ ン と し て function す る. し か し い ず れ も somatic に common に 発 now す る た め に, ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス を cropping す る と embryonic death も し く は raw ま れ て も 発 education is not complete の た め に mature individual で の line function analytical を う こ と は impossible で あ る こ と が report さ れ て い る. そ こ で I 々 は cre/loxP シ ス テ ム を with い る こ と に よ り, こ れ ら の シ ャ ペ ロ ン を arbitrary の organization や specific cells, period (コ ン デ ィ シ ョ ナ ル) に owe loss す る マ ウ ス を cropping し, mature individual で そ の line function analytical を う こ と を project し た. こ れ ま で に カ ル ネ キ シ ン の コ ン デ ィ シ ョ ナ ル ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス の ベ ク タ ー に し, ES cells into the を cropping す る こ と に よ り, the same group in え を た. そ れ ら の ES cells を B6 マ ウ ス の blastoderm cell に injection し て キ メ ラ マ ウ ス を as し, B6 マ ウ ス と の mating に よ り reproductive series へ の send confirm with を し た. Time に the CAG - cre マ ウ ス と の mating に よ り, systemic で カ ル ネ キ シ ン を owe loss さ せ た occasions に は, both reported り ホ モ owe damage of individual は growth is not complete の た め に perilous ど into yukon せ ず, sperm fertilization can の beg が 検 で き な い こ と を confirm し た. さ ら に SSCS specific に cre リ コ ン ビ ナ ー ゼ を 発 now す る ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス と mating さ せ た results, sperm cells specific に カ ル ネ キ シ ン を owe loss す る マ ウ ス を cropping す る こ と に successful し た. Line parallel し て っ て い る カ ル レ テ ィ キ ュ リ ン に つ い て も, キ メ ラ マ ウ ス の as に し success, B6 マ ウ ス と mating か ら カ ル レ テ ィ キ ュ リ ン の コ ン デ ィ シ ョ ナ ル ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス の cropping に successful し て い る.

项目成果

Selective passage through the uterotubal junction of sperm from a mixed population produced by chimeras of calmegin-knockout and wild-type male mice

• DOI: 10.1095/biolreprod.104.028647
• 发表时间: 2004-09-01
• 期刊: BIOLOGY OF REPRODUCTION
• 影响因子: 3.6
• 作者: Nakanishi, T;Isotani, A;Okabe, M
• 通讯作者: Okabe, M

レンチウイルスベクターを用いた遺伝子操作動物作製法

使用慢病毒载体的基因工程动物生产方法

• 发表时间: 2005
• 期刊: 脳21 8
• 作者: M.Ishii;B.Hamilton;伊川正人
• 通讯作者: 伊川正人

Neuromedin U has a novel anorexigenic effect independent of the leptin signaling pathway

• DOI: 10.1038/nm1106
• 发表时间: 2004-10-01
• 期刊: NATURE MEDICINE
• 影响因子: 82.9
• 作者: Hanada, R;Teranishi, H;Kojima, M
• 通讯作者: Kojima, M

Inoue N, Ikawa M, Nakanishi T, Matsumoto M, et al.: "Disruption of mouse CD46 causes an accelerated spontaneous acrosome reaction in sperm."Mol Cell Biol. 23(7). 2614-2622 (2003)

Inoue N、Ikawa M、Nakanishi T、Matsumoto M 等人：“小鼠 CD46 的破坏导致精子中自发顶体反应加速。”Mol Cell Biol。

Tergaonkar V, Bottero V, Ikawa M, Li Q, Verma I: "IkappaB kinase-independent IkappaBalpha degradation pathway : functional NF-KappaB activity and implications for cancer thepray"Mol Cell Biol. 23(22). 8070-8083 (2003)

Tergaonkar V、Bottero V、Ikawa M、Li Q、Verma I：“IkappaB 激酶独立的 IkappaBα 降解途径：功能性 NF-KappaB 活性及其对癌症治疗的影响”Mol Cell Biol。