1分子イメージングによるシャペロニンの作用機構の解明

通过单分子成像阐明伴侣蛋白的作用机制

• 批准号: 11780440
• 负责人: 田口 英樹
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11780440/
• 关键词: 分子シャペロン; GroEL; 1分子イメージング; フォールディング

1分子のレベルでのシャペロニンGroELとGroESが結合解離するようす、およびタンパク質の折れ畳みの1分子観察の統計的な解析から、これまで知られていない新しいGroEL/ES複合体の中間体があることを提唱した。さらにこの新しい中間体の存在を確かめるために、ATP加水分解の速度論的な解析を行った。また、シャペロニンと変性タンパク質との相互作用の1分子イメージングを行い、シャペロニン機能の全貌を1分子レベルで調べる手がかりを得た。1分子のシャペロニンが機能するようすをリアルタイムで調べるための第一歩としてシャペロニンGroELとGroESが結合解離するようすを1分子レベルで観察することに成功した。また、この実験系を発展させて変性タンパク質の折れ畳みの1分子観察を行った。Green Fluorescent Protein(GFP)とGroEL変異体を使用して1分子タンパク質フォールディングを見ることができた。以上の観察の時間経過を統計的に解析した結果、これまで知られていなかった新しいGroEL/ES複合体を検出することができた。

1 Molecules of the GroEL and GroES complexes are bound to dissociate, dissociate, and dissociate from each other. 1 Molecules of the GroEL and GroES complexes are bound to dissociate, dissociate, and dissociate from each other. The existence of new intermediates and the rate-theoretic analysis of ATP hydration are discussed. The interaction between the two molecules is the result of the interaction between the two molecules. The first step of the molecule's evolution is to observe the evolution of the molecule. The development of this system is based on the observation of molecular weight. Green Fluorescent Protein(GFP) and GroEL The results of the analysis of the above observations show that the new GroEL/ES complex has been identified.

项目成果

Pack C-G.: "Analysis of interaction between chaperonin GroEL and its substrate using Fluorscence correlation spectroscopy"Cytometry. 36. 247-253 (1999)

Pack C-G.：“使用荧光相关光谱分析伴侣蛋白 GroEL 与其底物之间的相互作用”细胞计数法。

Aoki,K.: "GroEL binds artificial proteins with random sequences."J.Biol.Chem.. 275. 13755-13758 (2000)

Aoki,K.：“GroEL 用随机序列结合人工蛋白质。”J.Biol.Chem.. 275. 13755-13758 (2000)

Watanabe,Y.: "Heat-inactivated proteins managed by DnaKJ-GrpE-ClpB chaperones are released as a chaperonin-recognizable nonnative form."J. Biol.Chem.. 275. 12388-12392 (2000)

Watanabe,Y.：“由 DnaKJ-GrpE-ClpB 伴侣管理的热失活蛋白质以伴侣蛋白可识别的非天然形式释放。”J.

Aoki K.: "GroEL binds artificial proteins with random sequences"J.Biol.Chem.. (in press). (2000)

Aoki K.：“GroEL 通过随机序列结合人造蛋白质”J.Biol.Chem..（正在出版）。

Shiseki,K.: "Synchronized Domain Opening Motion of GroEL is Essential for Communication between the Two Rings."J.Biol.Chem.. 276(In press). (2001)

Shiseki,K.：“GroEL 的同步域打开运动对于两个环之间的通信至关重要。”J.Biol.Chem.. 276（印刷中）。