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T細胞アナジーの維持におけるp38MAPキナーゼの役割に関する研究

p38MAP激酶维持T细胞无反应性的作用研究

基本信息

批准号：
12770167
负责人：
塚田晃三
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

T細胞アナジーの維持にp38MAPキナーゼの活性化が重要であることを分子生物学的に証明するため、次の実験を試みた。1)スーパー抗原Mls-1^aをin vivoに投与することによりCD4^+T細胞にアナジーを誘導し、アナジーT細胞をSB203580で前処置する又はしない場合で、TCR刺激後のMAPキナーゼ(ERK、p38)の活性化をin vitro kinase assay法を用いて解析した。その結果、アナジーT細胞のTCR刺激後のp38の活性化はナイーブT細胞に比べて強く継続的に応答した。一方、TCR刺激後のERKの活性化は、アナジーT細胞では顕著に低下していたが、SB203580で前処置することによりその活性化が回復した。2)レトロウィルスのシステムを用いてp38の上流分子であるMKK6 activeted form (MKK6(E))又はp38α wild type (wt)をナイーブT細胞に導入することにより増殖抑制が誘導されるかどうか、また、アナジーT細胞にp38α dominant nagative form (P38α (AGF))を導入することにより増殖の回復が誘導されるかどうかを解析した。MKK6(E)、p38αwt又はp38α(AGF)をインサートとしたpMSCV-IThy1.1ベクターをpackaging cellsに導入し、packaging cellsから産生されるレトロウィルスをCFSEラベルしたナイーブT細胞及びアナジーT細胞に感染させ、Thy1.1が発現した細胞のTCR刺激後の分裂回数で増殖応答への効果を評価した。その結果、MKK6(E)を導入されたナイーブT細胞の増殖は部分的に抑制され、p38αwtを導入されたナイーブT細胞の増殖は比較的強く抑制された。一方、P38α(AGF)の導入されたアナジーT細胞の増殖は回復傾向にあることが確認できた。

The activation of T cells in the maintenance of p38MAP is important for molecular biology. 1) The activation of Mls-1^a in CD4 +T cells induced by in vivo administration, in T cells treated with SB203580 and in vitro kinase assay after TCR stimulation. As a result, activation of p38 in T cells stimulated by TCR was stronger than that in T cells. On the one hand, ERK activation after TCR stimulation was reduced, and SB203580 activation was restored. 2) p38 alpha wild type (wt) was introduced into T cells using the MKK6 activated form (MKK6(E)) and p38 alpha dominant native form (P38 alpha (AGF)). MKK6 (E), p38αwt and p38α(AGF) are introduced into packaging cells, packaging cells are produced, CFSE is produced, T cells are infected, Thy1.1 cells are produced, and the number of mitotic cycles after TCR stimulation is increased. The results showed that MKK6 (E) was introduced to inhibit the proliferation of T cells, and p38αwt was introduced to inhibit the proliferation of T cells. On the one hand, it has been confirmed that the proliferation of Aranaji T cells introduced with P38α(AGF) has a reverse tendency.