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生化学的アプローチによる難聴遺伝子の同定と病態の解明

使用生化方法鉴定耳聋基因并阐明病理学

基本信息

批准号：
12877273
负责人：
川上潔
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Jichi Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

EYA1遺伝子は難聴や腎形成不全を伴うBOR (Branchio-oto-renal)症候群の原因遺伝子である。Eyaタンパク質はSixタンパク質やDachタンパク質、Gタンパク質と相互作用し、遺伝子の発現制御に関与することが知られている。本研究ではEyaタンパク質を含む複合体やDachとの相互作用が示されたタンパク質を含む複合体を精製し、遺伝子の発現制御にかかわる機能解析と新規なEya相互作用タンパク質の同定を行い、新規難聴遺伝子の発見につなげることを目指している。本年度は次のような研究実績を得た。(1)昨年度樹立したTagを付加したEyaタンパク質を発現するHeLa細胞株を大量に培養し、核抽出液を調製した。イオン交換カラムクロマトグラフィーを用いた後にtagを用いたアフィニティー精製を行うことで、Eya1と複合体を形成していると考えられる複数のタンパク質を確認できた。質量分析での同定にはさらに量を増やした精製が必要であった。(2)EyaとDachによる協同的な活性化にはCBPが関与する。Dachタンパク質はEyaの存在がなくても裸のDNAやクロマチンDNAに結合できることを見いだした。このDNA結合活性は、Dachの保存領域であるDD1ドメインによることを明らかにした。DD1ドメインはForkhead-Winged Helixであることが他のグループによって示され、我々の結果が構造的にも支持された。(3)Dachタンパク質を含む新規複合体の同定に用いるために、Dachを発現するHeLa細胞株を樹立しつつある。

EYA1 is the cause of BOR (Branchio-to-renal) syndrome. Eya In this study, the interaction between Eya complex and Dach complex was studied. The interaction between Eya complex and Dach complex was refined, and the generation and control of Dach complex were analyzed. The interaction between Eya complex and Dach complex was studied. This year's research results were achieved for the second time. (1)HeLa cell lines were cultured in large quantities and nuclear extracts were prepared. Eya1 complex is formed. Quality analysis is necessary to improve quality. (2)Eya and Dach cooperate to activate CBP. Dach's DNA is naked, and it's in the middle of everything. The DNA binding activity of Dach was detected by DNA sequencing. DD1: Forkhead-Winged Helix is supported by other components. (3)Dach's DNA contains new DNA complexes, which are used for identification, development and establishment of HeLa cell lines.