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葉緑体in vitro RNAエディティング・翻訳共役系の確立

叶绿体体外RNA编辑/翻译耦合系统的建立

基本信息

批准号：
13874111
负责人：
杉浦昌弘
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Nagoya City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

高等植物の葉緑体の転写産物では、CからUへのRNAエディティングにより一部の配列が変化する。その中で、ACGがAUGに変化して翻訳開始コドンを生じる。このエディティングから翻訳開始までの分子機構を解析する手法としてRNAエディティングと翻訳を連動して行うin vitro系の開発のため以下の研究を行った。1.In vitro系の改良昨年度は葉緑体in vitroRNAエディティング系の大幅な改良を行ったが、この系はP32標識mRNA基質を用いる。この基質調製が煩雑なため、より簡単な非アイソトープ法の開発を行った。蛍光標識ダイデオキシヌクレオチドとプライマー伸長法を組み合わせ効率よくアッセイできる手法が出来上がった。一方の、in vitro翻訳系の方も非アイソトープ化を進め、蛍光タンパク質mRNAを目的の葉緑体mRNAの後方に結合させ、翻訳産物を蛍光強度でアッセイする手法も完成した。上記の両in vitro系を一緒にして、RNAエディティングと翻訳の共役系の確立をめざしたが、両系の調製液の組成と反応組成が異なるため、充分活性のある共役系がまだ得られていない。2.In vitro系に適した植物種の探索一貫して最も解析の進んでいるタバコを使用してきたが、エンドウ葉緑体よりin vitroRNAエディティング系の開発をしたが、RNアーゼ活性が高いため、in vitro翻訳系の開発には適していないことが明らかになった。そこでキュウリ葉緑体についてin vitro系開発の適合性の調査を行ったが、充分な結果を出すまでには得られなかった。

A part of the chloroplast DNA sequence of higher plants is transformed into DNA. The ACG changes from the beginning to the end. The molecular mechanism of the tumor was analyzed and studied. 1. In vitro system improvement in chloroplasts in vitroRNA and in P32 marker mRNA matrix The development of this matrix modulation method is very simple. The light mark is divided into two parts: the first part is divided into two parts: the first part is divided into three parts: the first part is divided into four parts: the first part is divided into three parts: the first part is divided into four parts: the second part is divided into four parts: the first part is divided into four parts: the second part is divided into four parts: the first part is divided into four parts: the first part is divided into four parts: the second part is divided into four parts: the first part is divided into four parts: the second part is divided into four parts: the third part is divided into four parts: the third part is divided into four parts: the fourth part is divided into four A method for the synthesis of protein, protein, and target chloroplast mRNA in vitro-derived protein systems is described. The above mentioned system of vitro was established in the first step, and the composition of the system of vitro was established in the second step, and the composition of the system of vitro was established in the third step. 2. In vitro system, plant species are explored consistently, and their chloroplasts are used in vitro analysis. In vitro system development, RN activity is high, and in vitro system development is high. The investigation of the suitability of chloroplasts in vitro system development was carried out and the results were sufficient.