系統的ES細胞株樹立法の開発

系统性ES细胞系建立方法的开发

• 批准号: 13878132
• 负责人: 崎村 建司
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13878132/
• 关键词: C57BL; 6; ES細胞; 生殖系列遺伝キメラ; 近交系マウス; 脳機能解析; 内部細胞塊; キメラマウス; 生殖系列遺伝

胚性幹細胞(ES cell)は、胚盤胞の内部細胞塊を起源とする株化細胞で、多分化能を持ち遺伝子組換えマウスの作成に必須である。現在ノックアウトマウス作成に利用されているES細胞株のほとんどは、株化が容易で生殖系列遺伝するキメラが得やすい129系統由来のものである。しかし、129系統は脳に奇形があり脳の機能解析には不向きであるため、膨大な時間と手間をかけて他の系統のマウスに戻し交配する必要があった。そのため129系統以外の系統由来のES細胞が世界的に求められているが、他のマウス系統由来の高効率で生殖系列遺伝するES細胞株はほとんどないのが現状である。本研究の目的は、様々な系統のマウスからES細胞株を系統的に樹立する方法を開発し、今後の発生工学を利用した研究に供することである。まずC57BL/6系統マウスより再現性良くES細胞株を樹立する方法を確立するために、細胞を採取する胚の培養条件と多分化能を持つ細胞の採取の時期と方法を詳細に検討した。その結果、特定の時期に物理的な方法で内部細胞塊を分離することが、ES細胞株樹立に重要であることが明らかになった。この方法を用いてC57BL/6N由来ES細胞株「RENKA」を樹立することに成功した。さらにこのES細胞株から生殖系列遺伝をするキメラマウスを効率的に作成する方法を検討した。その結果、ES細胞を導入する胚の成長時期と導入するES細胞の数が重要な要素であることが明らかになった。これらの研究成果は、「近交系C57BL/6由来ES細胞株RENKA及びこの細胞を用いたキメラマウス作製法」として特許出願中である。

Embryonic stem cells (ES cells) are essential for the development of embryonic stem cells and blastoderm cells. Now we can make use of ES cell lines to develop reproductive series. We can make use of ES cell lines to develop reproductive series. However, the 129 system has no choice but to analyze the functions of its unique shapes, and it is necessary to expand the time and time to integrate the functions of other systems. ES cell lines derived from systems other than the 129 system have a high reproductive rate and are currently in use. The purpose of this study is to develop a method for the establishment of ES cell lines and to provide information for future bioengineering research. C57BL/6 system has been developed for the establishment of reproducible ES cell lines. The culture conditions for embryo production and the time for cell production are discussed in detail. The results, physical methods, and internal cell mass isolation at specific times are important for ES cell line establishment. This method was successfully used to establish the C57BL/6N-derived ES cell line RENKA. This paper discusses the method of making ES cell line reproductive sequence. The number of ES cells introduced into the embryo is an important factor. The results of this research are as follows: "Inbred line C57BL/6 derived ES cell line RENKA and its preparation method".

项目成果

Petrenko, A.B.: "Unaltered pain-related behavior in mice lacking NMDA receptor GluR ε 1 subunit"Neuroscience Research. (in press). (2003)

Petrenko, A.B.：“缺乏 NMDA 受体 GluR ε 1 亚基的小鼠的疼痛相关行为未改变”神经科学研究（2003 年出版）。

Minami, T.: "Characterization of the glutamatergic system for Induction and maintenance of allodynia"Brain Research. 895. 178-185 (2001)

Minami, T.：“诱导和维持异常性疼痛的谷氨酸能系统的特征”脑研究。

Ichikawa, R.: "Distal Extension of Climbing Fiber Territory and Multiple Innervation Caused by Aberrant Wiring to Adjacent Spiny Branchlets in Cerebellar Purkinje Cells Lacking Glutamate Receptor δ2"The Journal of Neuroscience. 22(19). 8487-8503 (2002)

Ichikawa, R.：“缺乏谷氨酸受体 δ2 的小脑浦肯野细胞中攀爬纤维区域的远端延伸和邻近多刺分支的异常接线”，《神经科学杂志》22(19)。

Ikeno, K.: "The Lurcher mutation reveals Ca2+ permeability and PKC modification of the GluR δ channels"Neuroscience Research. 41. 193-200 (2001)

Ikeno, K.：“Lurcher 突变揭示了 GluR δ 通道的 Ca2+ 通透性和 PKC 修饰”《神经科学研究》，41. 193-200 (2001)。

Takeuchi, T.: "Roles of the glutamate receptor ε2 and δ2 subunits In the potentiation and prepulse Inhibition of the acoustic startle reflex"Europian journal of Neuroscience. 14. 153-160 (2001)

Takeuchi, T.：“谷氨酸受体 ε2 和 δ2 亚基在声惊吓反射的增强和前脉冲抑制中的作用”《欧洲神经科学杂志》14. 153-160 (2001)。