利用iPS细胞技术建立基因敲除大鼠生产方法-猫眼课题宝

利用iPS细胞技术建立基因敲除大鼠生产方法

批准号：

21659070

负责人：

崎村建司

金额：

$1.92万

依托单位：

Niigata University

依托单位国家：

日本

项目类别：

Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research

财政年份：

2009

资助国家：

日本

项目状态：

已结题

起止时间：

2009 至 2010

来源：

https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21659070/

关键词：

ES細胞ラットノックアウト発生工学再生医学

项目摘要

项目成果

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本研究の目的は、世界中の研究者から希求されているラットES細胞を樹立し、遺伝子改変ラットの実用化を図ることである。そのために、ips細胞の樹立の際に開発された各種の手法を用いてES細胞株を樹立するとともに未分化状態でES細胞を培養できる条件を確立し、キメラ動物作製に挑戦することである。この目的のために、N2B27培地とGSK-3阻害剤であるCHIR99021、MAPK阻害剤であるPD0325901とを用いて、BNラット及びSDラット胚からES様細胞株を樹立することに成功した。これらの細胞株は、30代以上継代してもES細胞の未分化マーカーであるOct3/4、SOX2、Lin28、Nanogに対する抗体でいずれも染色されることから、ES細胞としての必要条件を満たしていると考えている。また、この培養条件が未分化を維持するのに十分なものと判断できる。さらにラットES細胞での相同組換えをおこなうために、ラットNSE遺伝子にVenus遺伝子を挿入したノックインベクターを構築し、薬剤による陽性クローンの選別条件を検討した。その結果、ラットのES細胞株ではマウスと異なりpgkプロモーターの発現は十分でなく、CAGプロモーターなどより強力なもので薬剤耐性遺伝子を駆動する必要があることが明らかになった。さらにラットES細胞からキメラ胚を作るためのマーカーとして、Venus遺伝子を組み込んだトランスジェニックESクローンの樹立に成功した。これらの成果は、ラットES細胞を用いた遺伝子改変ラット作出の実用化へ確実な寄与をするものである。

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会议论文

ES細胞での相同組換え上昇に関する因子の同定

鉴定与 ES 细胞同源重组增加相关的因素

DOI： --

发表时间： 2009

期刊：

影响因子： --

作者：

[Walton NM, Zhou Y, Kogan JH, Shin R, Webster M, Gross AK, Heusner CL, Chen Q, Miyake S, Tajinda K, Tamura K, Miyakawa T, Matsumoto M, 泰羅雅登, 渡辺美智子, 八矢幸大]

通讯作者：八矢幸大

The analysis of 26S proteasome conditional knockout mice for a motor neuron degenerative model.

26S 蛋白酶体条件敲除小鼠运动神经元退行性变模型的分析。

DOI： --

发表时间： 2009

期刊：

影响因子： --

作者：

[黒田裕, モハマド, M イスラム, Y.Tashiro]

通讯作者： Y.Tashiro

The endocannabinoid 2-arachidonoylglycerol produced by diacylglycerol lipase alpha mediates retrograde suppression of synaptic transmission

二酰甘油脂肪酶α产生的内源性大麻素2-花生四烯酰甘油介导突触传递的逆行抑制