iPS細胞技術を用いたノックアウトラット作製法の確立

利用iPS细胞技术建立基因敲除大鼠生产方法

• 批准号: 21659070
• 负责人: 崎村 建司
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21659070/
• 关键词: ES細胞; ラット; ノックアウト; 発生工学; 再生医学

本研究の目的は、世界中の研究者から希求されているラットES細胞を樹立し、遺伝子改変ラットの実用化を図ることである。そのために、ips細胞の樹立の際に開発された各種の手法を用いてES細胞株を樹立するとともに未分化状態でES細胞を培養できる条件を確立し、キメラ動物作製に挑戦することである。この目的のために、N2B27培地とGSK-3阻害剤であるCHIR99021、MAPK阻害剤であるPD0325901とを用いて、BNラット及びSDラット胚からES様細胞株を樹立することに成功した。これらの細胞株は、30代以上継代してもES細胞の未分化マーカーであるOct3/4、SOX2、Lin28、Nanogに対する抗体でいずれも染色されることから、ES細胞としての必要条件を満たしていると考えている。また、この培養条件が未分化を維持するのに十分なものと判断できる。さらにラットES細胞での相同組換えをおこなうために、ラットNSE遺伝子にVenus遺伝子を挿入したノックインベクターを構築し、薬剤による陽性クローンの選別条件を検討した。その結果、ラットのES細胞株ではマウスと異なりpgkプロモーターの発現は十分でなく、CAGプロモーターなどより強力なもので薬剤耐性遺伝子を駆動する必要があることが明らかになった。さらにラットES細胞からキメラ胚を作るためのマーカーとして、Venus遺伝子を組み込んだトランスジェニックESクローンの樹立に成功した。これらの成果は、ラットES細胞を用いた遺伝子改変ラット作出の実用化へ確実な寄与をするものである。

The purpose of this study is to establish and implement ES cells in the world. A variety of methods were used to establish ES cell lines and to culture ES cells in an undifferentiated state. For this purpose, N2B27 and GSK-3 inhibitors were successfully established in CHIR99021 and PD0325901. The cell lines were cultured for more than 30 generations. The culture conditions are not differentiated, and it is very difficult to determine whether the culture conditions are maintained. The selection conditions of the same group of ES cells were discussed. As a result, the ES cell line of the plant is very sensitive to the presence of pgk, CAG, and resistant genes. Today, the establishment of the " The results of this research are as follows: ES cells are used to modify the DNA sequence of the cells, and the DNA sequence of the cells is as follows:

项目成果

The analysis of 26S proteasome conditional knockout mice for a motor neuron degenerative model.

26S 蛋白酶体条件敲除小鼠运动神经元退行性变模型的分析。

• 发表时间: 2009
• 作者: 黒田裕;モハマド;M イスラム;Y.Tashiro
• 通讯作者: Y.Tashiro

ES細胞での相同組換え上昇に関する因子の同定

鉴定与 ES 细胞同源重组增加相关的因素

• 发表时间: 2009
• 作者: Walton NM;Zhou Y;Kogan JH;Shin R;Webster M;Gross AK;Heusner CL;Chen Q;Miyake S;Tajinda K;Tamura K;Miyakawa T;Matsumoto M;泰羅雅登;渡辺美智子;八矢幸大
• 通讯作者: 八矢幸大

マウス脳AMPA受容体サブユニットの定量的解析

小鼠脑 AMPA 受体亚基的定量分析

• 发表时间: 2009
• 作者: Inoue,N.;Watanabe,S.;宮川剛;渡辺美智子;松林伸幸;星詳子;Toh H;滝沢琢己;渡辺美智子;畦地裕統
• 通讯作者: 畦地裕統

The endocannabinoid 2-arachidonoylglycerol produced by diacylglycerol lipase alpha mediates retrograde suppression of synaptic transmission

二酰甘油脂肪酶α产生的内源性大麻素2-花生四烯酰甘油介导突触传递的逆行抑制

• 发表时间: 2010
• 期刊: Neuron
• 影响因子: 16.2
• 作者: Tanimura A;Yamazaki M;(他3名) Abe M;Kita Y;Hashimoto K;Shimizu T;Watanabe M;Sakimura K;Kano M.
• 通讯作者: Kano M.

ES細胞における相同組換え効率上昇法の開発

开发提高 ES 细胞同源重组效率的方法

• 发表时间: 2010
• 作者: Syotaro Obi;K.Yamamoto;J.Ando;et al;阿部学
• 通讯作者: 阿部学