iPS細胞技術を用いたノックアウトラット作製法の確立

利用iPS细胞技术建立基因敲除大鼠生产方法

基本信息

批准号：
21659070
负责人：
崎村建司
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Niigata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21659070/
关键词：
ES細胞ラットノックアウト発生工学再生医学

项目摘要

本研究の目的は、世界中の研究者から希求されているラットES細胞を樹立し、遺伝子改変ラットの実用化を図ることである。そのために、ips細胞の樹立の際に開発された各種の手法を用いてES細胞株を樹立するとともに未分化状態でES細胞を培養できる条件を確立し、キメラ動物作製に挑戦することである。この目的のために、N2B27培地とGSK-3阻害剤であるCHIR99021、MAPK阻害剤であるPD0325901とを用いて、BNラット及びSDラット胚からES様細胞株を樹立することに成功した。これらの細胞株は、30代以上継代してもES細胞の未分化マーカーであるOct3/4、SOX2、Lin28、Nanogに対する抗体でいずれも染色されることから、ES細胞としての必要条件を満たしていると考えている。また、この培養条件が未分化を維持するのに十分なものと判断できる。さらにラットES細胞での相同組換えをおこなうために、ラットNSE遺伝子にVenus遺伝子を挿入したノックインベクターを構築し、薬剤による陽性クローンの選別条件を検討した。その結果、ラットのES細胞株ではマウスと異なりpgkプロモーターの発現は十分でなく、CAGプロモーターなどより強力なもので薬剤耐性遺伝子を駆動する必要があることが明らかになった。さらにラットES細胞からキメラ胚を作るためのマーカーとして、Venus遺伝子を組み込んだトランスジェニックESクローンの樹立に成功した。これらの成果は、ラットES細胞を用いた遺伝子改変ラット作出の実用化へ確実な寄与をするものである。

这项研究的目的是建立大鼠ES细胞，这些细胞被世界各地的研究人员所追捧的，并将其实际使用转基因大鼠。为此，我们将使用在建立IPS细胞时开发的各种方法来建立ES细胞系，并建立以未分化状态培养ES细胞的条件，并挑战嵌合动物的产生。为此，我们使用N2B27培养基，CHIR99021，GSK-3抑制剂和PD0325901（MAPK抑制剂）成功地从BN和SD大鼠胚胎中成功建立了ES样细胞系。这些细胞系用针对Oct3/4，Sox2，Lin28和Nanog的抗体染色，即使在30年代及以上通过后，它们也是ES细胞的未分化标记，因此被认为满足了ES细胞的需求。此外，可以确定这些培养条件足以维持未分化的情况。此外，为了在大鼠ES细胞中进行同源重组，构建了一个敲门载体，其中将金星基因插入大鼠NSE基因中，并检查了选择用药物的阳性克隆的条件。结果表明，与小鼠不同，PGK启动子在大鼠ES细胞系中的表达不足，并且有必要驱动具有更强物质（例如CAG启动子）的耐药基因。此外，我们已经成功建立了一个转基因ES克隆，该克隆将金星基因纳入了从大鼠ES细胞中产生嵌合胚胎的标志物。这些结果无疑将有助于使用大鼠ES细胞的转基因大鼠产生的实际应用。

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

マウス脳AMPA受容体サブユニットの定量的解析

小鼠脑 AMPA 受体亚基的定量分析

DOI：
发表时间：
2009
期刊：
影响因子：
0
作者：
Inoue,N.;Watanabe,S.;宮川剛;渡辺美智子;松林伸幸;星詳子;Toh H;滝沢琢己;渡辺美智子;畦地裕統
通讯作者：
畦地裕統

ES細胞における相同組換え効率上昇法の開発

开发提高 ES 细胞同源重组效率的方法

DOI：
发表时间：
2010
期刊：
影响因子：
0
作者：
Syotaro Obi;K.Yamamoto;J.Ando;et al;阿部学
通讯作者：
阿部学

The analysis of 26S proteasome conditional knockout mice for a motor neuron degenerative model.

26S 蛋白酶体条件敲除小鼠运动神经元退行性变模型的分析。

DOI：
发表时间：
2009
期刊：
影响因子：
0
作者：
黒田裕;モハマド;M イスラム;Y.Tashiro
通讯作者：
Y.Tashiro

ES細胞での相同組換え上昇に関する因子の同定

鉴定与 ES 细胞同源重组增加相关的因素

DOI：
发表时间：
2009
期刊：
影响因子：
0
作者：
Walton NM;Zhou Y;Kogan JH;Shin R;Webster M;Gross AK;Heusner CL;Chen Q;Miyake S;Tajinda K;Tamura K;Miyakawa T;Matsumoto M;泰羅雅登;渡辺美智子;八矢幸大
通讯作者：
八矢幸大

高効率相同組換え法はC57BL/6ES細胞RENKAの生殖細胞分化能に影響しない

高效同源重组方法不影响C57BL/6ES细胞RENKA生殖细胞分化能力

DOI：
发表时间：
2010
期刊：
影响因子：
0
作者：
夏目里恵;他
通讯作者：
他

DOI：
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崎村建司其他文献

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DOI：
发表时间：
2019
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影响因子：
0
作者：
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通讯作者：
Hidetoshi Tokuyama

プロトカドヘリンーaクラスターにおける重複遺伝子の差次的発現

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DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
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通讯作者：
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DOI：
发表时间：
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0
作者：
船橋靖広;Ahammad Rijwan Uddin;張心健;Emran Hossen;Faruk Md. Omar;王緩緩;呉敏華;許伊凡;坪井大輔;西岡朋生;黒田啓介;天野睦紀;崎村建司;内野茂夫;山田清文;永井拓;貝淵弘三;NMDAによるCaMKII-RhoA-Rho-kinase経路の活性化が忌避学習を制御する
通讯作者：
NMDAによるCaMKII-RhoA-Rho-kinase経路の活性化が忌避学習を制御する