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ln-Cell NMR:細胞内蛋白質間相互作用の直接解析法の開発

细胞内核磁共振：开发直接分析细胞内蛋白质-蛋白质相互作用的方法

基本信息

批准号：
15657031
负责人：
伊藤隆
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Tokyo Metropolitan University (2005)The Institute of Physical and Chemical Research (2003-2004)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は,In-Cell NMRの手法を用いて,生細胞中の蛋白質間相互作用を直接観測するシステムを確立するというものである.平成17年度は平成16年度までの結果を基にして以下のポイントについて開発研究を行った.1.^<13>C/^<15>N二重標識を用いたIn-Cell NMRシグナルの帰属法の検討細胞内蛋白質の動態を解析するためには,In-Cell NMRを用いてシグナルの位置特異的帰属を行っていく必要がある.一方で平成16年度までの研究から,In-Cell NMR測定では,(1)細胞中の目的蛋白質の寿命が短い,(2)細胞中の蛋白質濃度が低いため感度が低い,(3)細胞中の粘性などの影響でシグナルの線幅が著しく増大する,などの問題点が明らかになっていた.平成17年度は,これらの問題を解決するために,異種核多次元NMRを短時間で感度よく測定する手法の確立を行った.具体的には,非線形サンプリング法で測定したデータを最大エントロピー法を用いて処理を行なうことで,数時間で十分な感度と分解能を持つ3次元In-Cell NMRスペクトルを得ることに成功した.この手法を用いることで,生きた大腸菌中のCalmodulin(14kDa),およびCalmodulinのN末端およびC末端ドメインについて,主鎖NMRシグナルの帰属を行なうことができた.またこの手法は,In-Cell NMRのみならず,これまで解析の困難であった,溶解度が低く不安定な蛋白質の解析にも極めて有用であることを示した.2.In-Cell NMRを用いた蛋白質間相互作用の解析の試みIn-Cell NMR法を発展させることで,細胞内の蛋白質間互作用を従来法より高分解能で観測できる手法となる可能性がある.CalmodulinおよびCalmodulinと相互作用する蛋白質の大腸菌内共発現系を構築し,細胞内での蛋白質間相互作用の解析を行なった.

The purpose of this study is,In-Cell The NMR technique was used to directly measure protein-protein interactions in biological cells and was established in 2017 and 2016. The result of the degree is the following: the following is the result of the research on the following: NMR analysis of intracellular protein dynamics using NMR method, In-Cell NMR uses a unique position-specific method that is necessary for NMR research. In-Cell For NMR measurement, (1) the target protein in the cell has a short lifespan, (2) the protein concentration in the cell is low and the sensitivity is low, (3) the protein in the cell isのstickyなどのeffectでシグナルの线widthが出しく Increase大する,などのThe problem is the problem of the year 2017 To solve the problem of heterogeneous nuclear multidimensional NMR and short-time sensitivity measurement, the method has been established. The specific method is the non-linear method. Measuring the maximum エントロピー method using いて processing を row なうことで, counting time で 10 な sensitivity と decomposition energy を holding つ 3-dimensional In-Cell NMR has been successfully performed using Calmodulin (14kDa) in coliform bacteria. modulin の N terminal および C terminal ドメインについて, main lock NMR シIn-Cell NMR analysis is difficult, the solubility is unstable, and the protein analysis is extremely useful. 2.In-Cell NMR is used to analyze protein-protein interactions and is used in In-Cell The NMR method is used to develop the protein-protein interaction in the cell. in Calmodulin interaction and protein interaction in coliform coliform bacteria, analysis of protein-protein interaction in cells and analysis of protein interactions in cells.

项目成果

期刊论文数量（5）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

生命秩序を担う生体超分子蛋白質・核酸・酵素 2005年8月号増刊

负责生命秩序的生物超分子：蛋白质、核酸和酶 2005 年 8 月特别版

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
影响因子：
0
作者：
M.Itoh;K.Nagatomo;Y.Kubo;Y.Sugimoto;O.Saitoh;M.Watanabe;Kaori Kurashima-Ito;Yasuhiro Isogai;Sundaresan Rajesh;伊藤隆(共著);伊藤隆(共著)
通讯作者：
伊藤隆(共著)

Heteronuclear multidimensional NMR and homology modelling studies of the C-terminal nucleotide-binding domain of the human mitochondrial ABC transporter ABCB6

人线粒体 ABC 转运蛋白 ABCB6 C 端核苷酸结合域的异核多维 NMR 和同源建模研究