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細胞内分子架橋法を利用した新たな機能的遺伝子クローニング法の開発

利用细胞内分子交联方法开发新的功能基因克隆方法

基本信息

批准号：
15659066
负责人：
荒瀬尚
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Osaka University (2004)Chiba University (2003)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659066/
关键词：
遺伝子スクリーニングレトロウィルスライブラリー cDNAライブラリーシグナル遺伝子 B細胞 CD8分子機能的遺伝子検索レトロウィルスリンパ球細胞内分子架橋リン酸化シグナル伝達エストロジェンレセプタータモキシフェン

项目摘要

本研究では、細胞内分子架橋を用いることによる新たなシグナル伝達分子検索法の開発を試みた。本研究では、細胞外CD8分子や変異型エストロジェンレセプターやFK結合タンパクとのキメラ分子が産生されるような新たなレトロウイルスcDNAライブラリー用ベクターを開発し、ライブラリーから産生されたキメラ分子が、架橋刺激によって正常に活性化されるかを検討し、本法が可能かどうかを明らかにする。本方法では、キメラ分子のライブラリーの作製が必要なため、cDNAライブラリーのサイズや質が非常に重要な要因となる。そこで、まず、CD8分子とのキメラライブラリーに対してcDNAのサイズを最適化したライブラリーの作製を行なった。その結果、新たなB細胞活性化分子として、NFAM1をクローニングした。NFAM1のトランスフェクタントやトランスジェニックマウスを用いることにより、NFAM1はB細胞の活性化や分化に重要な機能を担っている分子であることが明らかになったと同時に、本法が、シグナル伝達分子の解明に非常に有用な方法であることが判明した(Ohtsuka et al.Proc.Natl.Acad.Sci USA 2004)。さらに、最適化したcDNAライブラリーを用いて、シグナル伝達分子の検索を行なったところ、4回膜貫通型の新規分子をクローニングし、B細胞の生存に関与していると思われた(Suenaga et al.投稿中)。以上のように、CD8キメラライブラリーを用いた細胞内架橋によるシグナル伝達分子は、ポストゲノムの時代において、重要な機能的遺伝子検索方法であることが明らかになった。

In this study, molecular scaffolding and intracellular molecular scaffolding were used to conduct a pilot test using the molecular method. In this study, we used extracellular CD8 molecules to generate DNA fragments. In this study, we used both extracellular and extracellular cDNA molecules to generate DNA fragments. In this study, we used extracellular DNA molecules, extracellular DNA molecules, DNA fragments, extracellular DNA molecules, recombinant DNA molecules, scaffold stimuli, normal and active molecules. It is possible that this Law may provide information on the subject matter. This method is very important because it is very important to make sure that it is necessary to use this method, and that cDNA is very important. In this case, the CD8 molecules do not need to be processed. They are called cDNA molecules. They are the most efficient molecules. The results showed that the activating molecules of the new B cells were activated, and that of NFAM1 cells was significantly higher than that of the control. It is very important for the NFAM1 to determine the activity and differentiation of the cells in the system by using the computer, NFAM1, and so on. This method is very useful for the identification of the data in the same time, this method and the method is very useful (Ohtsuka et al.Proc.Natl.Acad.Sci USA 2004). In this paper, the most effective methods are used, the most effective methods are cDNA, the most efficient, the most effective, the most effective, the most In the contribution). The above information and CD8 devices are used to detect the number of molecules in the cell, the generation of the cell, and the importance of the machine.