単一遺伝子病に対する新しい遺伝子診断法の開発と応用

单基因疾病遗传诊断新方法的开发与应用

基本信息

批准号：
15659241
负责人：
松原洋一
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659241/
关键词：
遺伝子診断遺伝子変異遺伝子多型免疫クロマトグラフィー ELISA

项目摘要

本研究の目的は、臨床の場で簡便・迅速に遺伝子変異が検出できる遺伝子診断法を開発し、その臨床応用を検討することである。本研究では、研究者が考案した新しい手法(CASSOH法)に改良を加えその臨床応用をおこなった。疾患や薬理遺伝学的遺伝子多型によっては、複数の遺伝子変異や多型が関与していることも少なくなく、このような場合、遺伝子診断法のマルチプレックス化が望ましい。そこで私たちは、CASSOH法の最終検出ステップに、試験紙ではなくイムノアフィニティーとELISA法を組み合わせた新しい手法を開発した。ここでは、PCR反応液をチップ上のメンブレンに吸着させ、試薬を順次加えることによって青の発色で多型の有無を検出する。チップには特別の工夫が加えられており、添加された液はすべてメンブレン下部のパッドに吸収されるため、通常のELISAのように廃液を処理する必要がない。また、多数のチップをケースに収納することによってマルチウェルプレートのフォーマットで用いることも可能である。この方法(CASSOH-ELISA法)は、比較的高いスループットを持ちながら、特別の機器を用いることなく肉眼で遺伝子型を判定できるというこれまでにない特徴を有しており、今後多くの遺伝子診断に応用可能と考えられる。

这项研究的目的是开发一种遗传诊断方法，该方法允许在临床环境中轻松，快速检测遗传突变，并检查其临床应用。在这项研究中，我们对研究人员设计的一种新方法（CassoH方法）进行了改进，并将其应用于其临床应用。根据疾病或药物遗传学多态性，经常涉及多个基因突变和多态性，在这种情况下，希望遗传诊断方法多重。因此，我们开发了一种新方法，将免疫亲和力和ELISA方法（而不是测试纸）结合在一起，作为CassoH方法的最终检测步骤。在这里，PCR反应溶液被吸附到芯片上的膜上，并添加一种试剂，以检测由于蓝色发育而引起的多态性。已将特殊的独创性添加到芯片中，并且所有添加的液体都被吸收到膜下方的垫子中，因此无需像常规ELISA一样处理废物液体。此外，还可以通过在情况下存储大量芯片来以多绿色板格式使用。这种方法（Cassoh-Elisa方法）具有前所未有的特征，即不使用特殊设备可以用肉眼确定基因型，并且被认为适用于将来许多遗传诊断。