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フェニルケトン尿症モデルマウスにおける遺伝子治療の基礎的研究

苯丙酮尿症模型小鼠基因治疗的基础研究

基本信息

批准号：
07670835
负责人：
松原洋一
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07670835/
关键词：
フェニルケトン尿症遺伝子治療アデノウィルスベクター

项目摘要

フェニルケトン尿症のモデルマウスを対象として、遺伝子治療の基礎的検討を行った。本症は、肝臓のフェニルアラニン水酸化酵素遺伝子の異常によって生じ、重篤な知能障害をひきおこす常染色体劣性遺伝疾患である。まず、HVJ-リボソームを用いてヒトのフェニルアラニン水酸化酵素cDNAをこのマウスに導入した。その結果、肝臓において遺伝子導入と発現が認められたが、その効率は低く、マウスの血清フェニルアラニン値を低下させるには至らなかった。そこで、組換えアデノウイルスベクターを用いた遺伝子治療の検討を行った。そのために、CAGプロモーター下流にヒトフェニルアラニン水酸化酵素のcDNAを組み込んだ、非増殖型5型アデノウイルスを作成した。スクリーニングによって選択した9個のウイルスクローンを検討したところ、いずれも目的とする組換えウイルスであることが証明された。得られたウイルスをCOS7細胞に感染させたところ、m.o.i.=3.0の力価で、正常マウス肝に匹敵する酵素比活性を得ることができた。つぎに、モデルマウスの門脈に4x10^8p.f.u.のウイルスを投与したところ、24時間後には、血清フェニルアラニン値の正常化が認められ、その効果は7日間持続した。10日後には、再び血清フェニルアラニンが遺伝子導入前の値に戻った。同様の結果は、尾静脈からの全身投与でも観察された。さらに、遺伝子導入後10日頃より、灰白色であった体毛の黒色への変化が観察され、14日目には野生型マウスとほぼ同じ毛色に変化した。今回の研究で、組換えアデノウイルスを用いた遺伝子導入によって、一過性ではあるが、モデルマウスの表現型を正常化させることが可能であることが証明された。このことは、フェニルケトン尿症の遺伝子治療に対して、組換えアデノウイルスベクターが有用であることを示唆するものと考えられる。

フェニルケトンのモデルマウスを対肖として, the basics of the treatment of 缝子子のモデルマウスを対肖とした. This disease is caused by an abnormality in the liver's water-acidifying enzymes and an abnormality in the liver's water-acidifying enzymes. It is caused by autosomal-inferior autosomal dominant syndrome.まず, HVJ-リボソームを was introduced into した using いてヒトのフェニルアラニン water acidifying enzyme cDNA をこのマウスに.そのRESULT, gan臓において伝子 Import と発现がcognize められたが, そのefficiencyはLow く, マウスのSerumフェニルアラニン値をlow させるには to らなかった.そこで, group replacement えアデノウイルスベクターを use いた缝子 to treat の検曒行った.そのために、CAGプロモーター下流にヒトフェニルアラニンwater acidifying ferment The original cDNA type を group み込んだ and the non-proliferative type 5 アデノウイルスを were made.スクリーニングによって选択した9 pieces of のウイルスクローンを検曰たところ, いずれもpurpose and とする group replace えウイルスであることがprove された. Obtain infection of COS7 cells by られたウイルスをにさせたところ, m.o.i.=3 .0 の力価で, normal マウス liver に is comparable to する enzyme specific activity をることができた.つぎに、モデルマウスの门行に4x10^8p.f.u.のウイルスをinvest and したところ、2 After 4 hours, the normalization of the serum, the normalization of the serum, and the effect of the serum will be maintained for 7 days. After 10 days, には and びserum フェニルアラニンが缝子 will be introduced into the former のつに戻った. The result of the same disease is the same as the tail vein and the whole body is injected into the body.さらに, 10 days after the introduction of the widow, より, gray and white body hair, black への変The 14th day of the 14th day of the 14th day, the wild-type マウスとほぼhas the same coat color as the に変化した. This time's research, group replacement, introduction of いた缝子, and transient sexるが,モデルマウスのphenotypeをnormalizationさせることがpossibleであることがproveされた.このことは, フェニルケトンuria の伝子treatment に対して, group replacement えアデノウイルスベクターが Useful であることをshows instigation するものと卡えられる.