癌遺伝子関連ゲノム情報を活用した先天奇形症候群原因遺伝子の同定

利用癌症基因相关基因组信息鉴定导致先天性畸形综合征的基因

基本信息

批准号：
20018001
负责人：
松原洋一
金额：
$ 4.86万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20018001/
关键词：
遺伝子シグナル伝達癌脳神経疾患遺伝子診断 RAS 発癌癌遺伝子

项目摘要

本研究の目的は、従来、体細胞変異が数多く検出されている癌遺伝子およびそのシグナル伝達経路関連遺伝子を候補とし、先天奇形症候群の病因遺伝子を同定するための戦略について検討と実証をおこなうこと、さらに癌原遺伝子を生殖細胞変異にもつ患者における発癌のメカニズムを明らかにすることである。まず、選定した候補遺伝子について、症例より得られた検体を対象に、順次、遺伝子変異の検索を行った。またシークエンスにより遺伝子変異が認められなかった症例については、MLPA法を用いて候補遺伝子のコピー数の増減の有無を検索した。その結果、RAS/MAPK症候群の原因遺伝子としてあらたにRAF1およびSHOC2が同定された。つぎに、変異蛋白の細胞内発現による機能解析を実施した。まず、ヌーナン症候群の患者18人で見出したRAF1遺伝子変異について、臨床症状との相関と変異蛋白の機能解析をおこなった。RAF1遺伝子変異を持つ場合、PTPN11やSOS1などの他の遺伝子異常に比べて肥大型心筋症と低身長の合併頻度が有意に高かった。変異RAF1蛋白の機能解析では、抑制性のS259部位のリン酸化が低下しており、そのためにRAF1活性抑制に重要な14-3-3蛋白との結合が低下し、非刺激時にも下流のERKを活性化していることが明らかとなった。一方、SHOC2遺伝子変異を有している患者は11人同定され、詳細な解析を実施中である。コピー数多型(CNV)の探索のために、DNAマイクロアレイシステムを立ち上げ、患者での検索を開始した。

这项研究的目的是研究并证明使用癌基因鉴定先天性畸形综合征的发病机制基因的策略，其中已经检测到许多体细胞突变，并与其信号传导途径相关的基因作为候选者，并阐明原生构基因的生殖细胞突变的癌变机制。首先，对于选定的候选基因，依次搜索了从病例中获得的标本。此外，对于未观察到通过序列观察到遗传突变的情况，使用MLPA方法来寻找候选基因副本数量的存在或不增加或不增加。结果，RAF1和SHOC2被新鉴定为RAS/MAPK综合征的致病基因。接下来，通过突变蛋白的细胞内表达进行功能分析。首先，我们与临床症状和突变蛋白的功能分析进行了相关性，该突变蛋白在18例Noonan综合征患者中发现了RAF1基因突变。当携带RAF1基因突变时，肥厚性心肌病的频率和矮小的身材明显高于其他遗传异常，例如PTPN11和SOS1。突变RAF1蛋白的功能分析表明，S259位点的抑制性磷酸化降低，从而降低了与14-3-3蛋白的结合，这对于抑制RAF1活性很重要，即使不刺激，它也会激活下游ERK。另一方面，已经确定了11例SHOC2基因突变的患者，并且正在进行详细的分析。启动了DNA微阵列系统，以搜索拷贝号多态性（CNV），并开始了患者搜索。