免疫拒絶が生じない自己組織から作製する体性幹細胞樹立法開発の基礎的研究

开发一种从自体组织产生不引起免疫排斥的成体干细胞方法的基础研究

基本信息

  • 批准号:
    15659365
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.11万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Exploratory Research
  • 财政年份:
    2003
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2003 至 2004
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

自己組織から採取し、自己への応用を将来的に目指した、15代以上の継代が可能な体性幹細胞作製法の確立を目的として以下の検討を行った。1.検討した細胞ソースA)皮膚:真皮層を含む皮膚片を細片化した後、培養皿へ付着させ接触部分からの細胞の移行を得たB)骨髄:大腿骨より骨髄を採取し、pipettingにより骨髄細胞を単離したC)小腸粘膜:十二指腸粘膜上皮をトリプシン消化した後、細胞を単離したD)胎盤・羊膜:コラゲナーゼもしくはトリプシン消化後、細胞を単離したE)肝臓:コラゲナーゼ灌流消化した後、比重遠心法により肝実質・非実質細胞分画に分離したF)膵管:膵をコラゲナーゼ消化後、膵管をピックアップし、ディスパーゼにて膵管上皮細胞を単離した2.培養条件A)基本培地:αMEMB)添加:leukemia inhibitory factor(LIF),B27,epidermal growth factor(EGF),fibroblast growth factor(FGF),10% fetal bovine serum(FBS)3.結果A)皮膚(全層)からは130回の分裂が可能な継代可能な細胞が得られた。この細胞は、凍結・解凍の処置を行っても増殖活性の低下は見られず、B27,EGF,FGF添加および無血清の培養条件において、Nestinに対して陽性の染色性を示し、体性幹細胞と類似した性格を有した。ヌードマウス皮下移植実験では、奇形腫の形成能を認めなかった。B)骨髄、小腸粘膜、胎盤・羊膜、膵管由来の細胞からは、in vitroで増殖可能な細胞を獲得できなかった。細胞株化に至る培養条件、添加物のさらなる検討が必要である。しかしながら、胎盤由来細胞より、インスリン発現細胞への分化誘導に成功し、糖尿病細胞移植療法への可能性が示唆された。C)肝非実質細胞分画より、in vitroで肝細胞特異的機能を保持したまま増殖可能な小型の肝細胞(小肝細胞)を得た。ラット70%肝切除モデルにおける倍数体および増殖性の解析により、肝臓におけるstem/progenitor cellとしての役割を示唆する結果を得た。4.結語A)全層皮膚からは、長期(130代以上)継代可能な類体性幹細胞を樹立したB)骨髄、小腸粘膜、胎盤・羊膜、膵管由来の細胞からの体性幹細胞の樹立には成功しなかったC)分離された小肝細胞は、細胞移植ソースとしての可能性が示唆された
The purpose of establishing a method for the production of somatic stem cells in the future is to establish a method for the production of somatic stem cells in more than 15 generations 1. Cell culture A) Skin: true cortex, skin slice, culture dish, contact part, cell migration B) Bone culture: thigh bone culture C) Small intestine mucosa: Duodenal mucosa epithelium: After digestion, cell separation D) Placenta·Amnion: After digestion, cell separation E) Liver: After perfusion digestion, specific gravity center: Liver cytoplasm·Non-cytoplasm cell separation F) Liver tube: 2. Culture conditions A) Basic culture: α MEMB) Addition: leukemia inhibitory factor (LIF), B27, epidermal growth factor (EGF), fibroblast growth factor (FGF), 3. Results A) Skin (full thickness) divided into 130 cycles, and the cells could be regenerated. The cells were frozen, thawed and treated with low proliferation activity, B27, EGF, FGF addition and serum-free culture conditions. Nestin showed positive staining and similar personality of somatic stem cells. Subcutaneous transplantation is a good way to recognize the formation of abnormal swelling. B) Bone marrow, small intestine mucosa, placenta, amniotic membrane, duct origin of cells, in vitro to proliferate possible cells to obtain. Culture conditions, additives and other necessary conditions for cell strain development. The successful induction of placenta-derived cell differentiation and the possibility of diabetic cell transplantation therapy have been demonstrated. C) Liver non-cytoplasmic cell differentiation, in vitro, liver cell-specific functions are maintained, and small liver cells (small liver cells) can be propagated. 70% hepatectomy was performed on the stem/progenitor cells and the results were obtained. 4. Conclusion A) Establishment of somatic stem cells from full-thickness skin, long-term (more than 130 passages) generation B) Establishment of somatic stem cells from bone, small intestine mucosa, placenta, amniotic membrane and ductal origin C) Isolation of small hepatocytes and cell transplantation

项目成果

期刊论文数量(10)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
松下通明, 他: "tissue engineeringによる肝組織再構成"Surgery Frontier. 10. 245-248 (2003)
Michiaki Matsushita 等人:“通过组织工程重建肝脏组织”Surgery Frontier,10. 245-248 (2003)。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
高増殖能を有する小肝細胞:再生医療の細胞源としての応用
具有高增殖潜力的小肝细胞:作为再生医学细胞来源的应用
  • DOI:
  • 发表时间:
    2005
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    森田恒彦 他
  • 通讯作者:
    森田恒彦 他
エレクトロポレーションによる肝細胞への遺伝子導入の試み
尝试通过电穿孔将基因导入肝细胞
  • DOI:
  • 发表时间:
    2003
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    小林智 他;松本秀一朗 他;松本秀一朗 他;小林 智 他;森田恒彦 他
  • 通讯作者:
    森田恒彦 他
ラット70%肝切除モデル再生肝における小肝細胞の増殖性解析
大鼠70%肝切除模型再生肝小肝细胞增殖分析
  • DOI:
  • 发表时间:
    2005
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Chiba T;Otsuka T;et al.;小林智 他
  • 通讯作者:
    小林智 他
胎盤由来インスリン分泌細胞の糖尿病細胞治療への可能性
胎盘来源的胰岛素分泌细胞用于糖尿病细胞治疗的可能性
  • DOI:
  • 发表时间:
    2004
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    小林智 他;松本秀一朗 他
  • 通讯作者:
    松本秀一朗 他
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松下 通明其他文献

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