DNAアレイを用いた造血細胞分化におけるメチル化プロファイルの網羅的経時的検討

使用 DNA 阵列对造血细胞分化过程中的甲基化谱进行综合纵向研究

• 批准号: 16659250
• 负责人: 小川 誠司
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659250/
• 关键词: マイクロアレイ; メチル化; 造血幹細胞; 分化; コピー数解析; モデルマウス; Affymetrix

DNAのメチル化のON/OFFは遺伝子の発現制御の重要なメカニズムであるが、ゲノムのメチル化は個体の発生を通じて劇的な変化を受ける。本研究では、CGHアレイの技術を応用することにより造血幹細胞の発生・分化の過程でゲノムに生ずるメチル化の状態を網羅的に解析し、ゲノムのメチル化による造血発生の制御を明らかにすることを試みた。(1)CGHアレイを用いたゲノムのメチル化の網羅的解析ゲノムのBACクローンはRPCIより購入した。約3000クローンからなるBAC DNAをsmall scaleで調整し、DOP PCR法を用いてDNA増幅を行ったのち、GMS428アレイヤーを用いてガラススライド上にスポットすることによりゲノムアレイを作成した。CGH法によりメチル化解析法の基礎的検討を行う目的で、全骨髄細胞からゲノムDNAを調整し、メチル化特異的PCR法によりメチル化領域を含むゲノム断片をPCR増幅し、メチル化非特異的なPCRにより増幅したゲノムとともに、上記で作成したアレイ上でCGHを行った。上記の方法により、複数の領域について、メチル化特異的プローブによりシグナルの増強が確認された。(2)マウス造血幹細胞の分画とDNA調整マウスより骨髄単核球細胞を採取し、FACS Vantageによりc-Kit+Scal+Linage-の分画のソーティングを行い、得られた1x10^5個の細胞からゲノムDNAの抽出を行い、約2ugのDNAを回収した。今後得られた造血幹細胞分画のゲノムとlinage-細胞のゲノムの比較を行うことにより、造血幹細胞の分化に伴って特異的にメチル化を受けるゲノム領域の同定を試みる予定である。

DNA DNA ON/OFF, DNA on/OFF. This study aims to explore the application of CGH technology in the development and differentiation of hematopoietic stem cells, including the analysis and control of hematopoietic development. (1) The analysis of the network of CGH is based on the analysis of BAC and RPCI. About 3000 grams of BAC DNA is adjusted on a small scale, DOP PCR is used to increase DNA amplitude, GMS428 is used to increase DNA amplitude, and GMS428 is used to increase DNA amplitude. The CGH method is used for the basic analysis of whole bone cells, including DNA regulation, PCR amplification, non-specific PCR amplification, and CGH preparation. The above method is used to identify, identify, and identify specific areas of interest. (2)The analysis and DNA regulation of hematopoietic stem cells were carried out by FACS Vantage, c-Kit+Scal+ Linage-analysis and DNA extraction, and about 2 ug of DNA was extracted. In the future, the differentiation of hematopoietic stem cells will be determined by comparing the characteristics of hematopoietic stem cells with those of linage-cells.

项目成果

AML-1 is required for megakaryocytic maturation and lymphocytic differentiation, but not for maintenance of hematopoietic stem cells in adult hematopoiesis

• DOI: 10.1038/nm997
• 发表时间: 2004-03-01
• 期刊: NATURE MEDICINE
• 影响因子: 82.9
• 作者: Ichikawa, M;Asai, T;Kurokawa, M
• 通讯作者: Kurokawa, M

Educational Program Book : Japanese Society of Hematology and Japanese Society of Clinical Hematology.

教育计划书：日本血液学会和日本临床血液学会。

• 发表时间: 2004
• 作者: Goyama S;Ogawa S;et al.;Ogawa S
• 通讯作者: Ogawa S

Runx1/AML-1 Ranks as a Master Regulator of Adult Hematopoiesis

• DOI: 10.4161/cc.3.6.951
• 发表时间: 2004-04
• 期刊: Cell Cycle
• 影响因子: 4.3
• 作者: M. Ichikawa;T. Asai;S. Chiba;M. Kurokawa;S. Ogawa

The transcriptionally active form of AML1 is required for hematopoietic rescue of the AML1-deficient embryonic para-aortic splanchnopleural(P-Sp)region.

AML1 的转录活性形式是 AML1 缺陷的胚胎主动脉旁内脏胸膜 (P-Sp) 区域的造血拯救所必需的。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Blood 104
• 作者: Goyama;S.
• 通讯作者: S.

AML1 is functionally regulated through p300-mediated acetylation on specific lysine residues

• DOI: 10.1074/jbc.m400355200
• 发表时间: 2004-04-09
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Yamaguchi, Y;Kurokawa, M;Hirai, H
• 通讯作者: Hirai, H