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体性幹細胞と膵島β細胞の細胞融合法の開発研究

成体干细胞与胰岛β细胞细胞融合方法的研发

基本信息

批准号：
16659329
负责人：
佐藤直樹
金额：
$ 1.86万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

膵島移植に代表される細胞移植療法は、免疫抑制法や細胞工学の進歩により、画期的に成功率が向上してきている。しかし、その一方で、移植医療共通の問題としてドナー細胞の絶対的な不足が深刻な問題となっており、新しい移植細胞ソースの開発が求められている。われわれは、細胞工学的手法により細胞移植に応用可能なインスリン分泌細胞を膵島細胞と組織幹細胞の細胞融合によって創生することを目標とし実験を行った。ラット膵島細胞と神経幹細胞をAC条件70V 1MHz、DC条件600V 20μsecパルス回数2回、小肝細胞をAC条件70V 1MHz、DC条件700V 20μsecパルス回数3回によってそれぞれ電気的細胞融合可能であった。さらに、至適な培養条件を設定するために、InsulinI promotor下にEGFPを発現するトランスジェニックマウスの神経幹細胞を単離、Neurosphere法によって培養。細胞を分散し、細胞融合を行った。融合細胞のGFP発現を蛍光観察およびFCMにて解析したところ、培養条件は無血清下Opti-MEM+EGF40ng/ml+bFGF20ng/mlにて浮遊培養することで直径50〜200μmのSphereを形成する細胞群が出現し、これらがGFPを発現していた。しかし、これらの多くはアポトーシス細胞であり、継代維持培養が困難であった。今後、これら融合細胞の維持培養法の確立によってさらなる解析などを行っていきたいと考えている

Island transplantation represents the progress of cell transplantation therapy, immunosuppression and cell engineering, and the success rate of the project has increased. The common problems of transplant medicine and the deficiency of transplant cells are profound problems and the development of new transplant cells is required. Cell transplantation is a method of cell engineering. It is possible to use secretory cells and tissue stem cells for cell fusion. Cell fusion of isolated islet cells and neurostem cells under AC conditions of 70V 1MHz, DC conditions of 600V 20μsec, cycle number of 2 cycles, small hepatocytes under AC conditions of 70V 1MHz, DC conditions of 700V 20μsec, cycle number of 3 cycles may occur. In addition, the optimal culture conditions were set, EGFP was produced under InsulinI promoter, and the neural stem cells were isolated and cultured by Neurosphere method. Cell dispersion, cell fusion. GFP expression in fused cells was detected by light and analyzed by FCM. Under the culture conditions of Opti-MEM+EGF40ng/ml+bFGF20ng/ml in the absence of serum, a cell population was formed with spheres of 50 ~ 200μm diameter. It is difficult to maintain the culture of the cells. In the future, the establishment of maintenance culture methods for fused cells will be discussed.