FRETを用いたアンジオテンシンII受容体シグナル可視化の試み

尝试使用 FRET 可视化血管紧张素 II 受体信号

• 批准号: 17659227
• 负责人: 塩島 一朗
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659227/
• 关键词: 心不全; アンジオテンシンII; 心肥大; FRET

アンジオテンシンII(AII)シグナルは心不全の病態生理において極めて重要な意義を持つ.我々は,心筋細胞の伸展刺激によりリガンドであるAIIが存在しなくてもAT1受容体活性化が生じることを見いだした[Nat Cell Biol 2004;6:499).伸展刺激によるAII非依存性のAT1受容体活性化がどのような機序でおこり,どのように心不全発症に関与しているのかについては現時点では不明である.そこで本研究では,FRETの技術を用いてAT1受容体シグナルを可視化し,さらにそれを利用して心不全発症機構の解析を行うことをその日的とした.FRETプローブの作成には,黄色の蛍光を発するYFP(yellow fluorescence protein)および青色の蛍光を発するCFP(cyan fluorescence protein)の2種類の蛍光蛋白を同一分子内に人為的に組み込む必要がある.これを433nmで励起すると,YFPとCFPが物理的に離れた場所にある場合はCFPが励起され青色の蛍光を発するのに対して,YFPとCFPが近接して存在する場合にはCFPが励起されて発する蛍光によってさらにYFPが励起され,黄色の蛍光が得られる(FRET現象).AT1受容体のようなG蛋白質共役型受容体の場合は,活性化によって第3細胞内ドメインがC末細胞内ドメインから離れるように構造変化が起こると考えられているので,第3細胞内ドメインおよびC末細胞内ドメインにそれぞれYFPとCFPを組み込むと,受容体活性化によってFRETが減弱すると考えられる.平成17年度には通常の方法でFRETプローブの作製を試みたが,高いFRET効率が得られるプローブが作製できず,平成18年度はさらにYFPとCFPを入れ替える,あるいは,YFPやCFPの前後に数アミノ酸のspacerを挿入するなどの改変を行った.FRET効率に若干の改善が認められたものの残念ながらAT1活性化を画像化するのに十分なFRETプローブは得られなかった.今後は2分子FRETなど異なる機序によるAT1活性化を画像化を目指して研究を進めていきたい.

ア ン ジ オ テ ン シ ン II (AII) シ グ ナ ル は heart insufficiency の pathological physiology に お い て extremely め て な significance を つ. I 々 は, the heart muscle cells の stretch stimulus に よ り リ ガ ン ド で あ る AII が exist し な く て も AT1 born by let body activeness が じ る こ と を see い だ し た [Nat Cell Biol. 2004; 6:49 9) stretch stimulus に よ る AII the dependency の AT1 by let body activeness が ど の よ う な machine sequence で お こ り, ど の よ う に heart insufficiency 発 disease に masato and し て い る の か に つ い て は now point で は unknown で あ る. そ こ で this study で は, FRET を の technology with い て AT1 by let body シ グ ナ ル を visualization し, さ ら に そ れ を using し て heart insufficiency 発 disease agency の parsing line を う こ と を そ の day と し た. FRET プ ロ ー ブ の made に は, yellow の 蛍 light を 発 す る YFP (yellow fluorescence protein) お よ び cyan の 蛍 light を 発 す る CFP (cyan fluorescence Protein) の 2 kinds の 蛍 light protein を に artificial に group within the same molecular み 込 む necessary が あ る. こ れ を 433 nm で wound up す る と, YFP と CFP が physical に from れ た places に あ る occasions は CFP が wound up さ れ cyan の 蛍 light を 発 す る の に し seaborne て, YFP と CFP が nearly meet し て exist す る occasions に は C FP が wound up さ れ て 発 す る 蛍 light に よ っ て さ ら に YFP が wound up さ れ, yellow の 蛍 が too light ら れ る phenomenon (FRET) AT1 by let body の よ う な G protein type by body は の occasions, total service activeness に よ っ て in cells 3 ド メ イ ン が C at the end of the intracellular ド メ イ ン か ら from れ る よ う に structure - the が up こ る と exam え ら れ て い る の で, 3 cell ド メ イ ン お よ び C at the end of the intracellular ド メ イ ン に そ れ ぞ れ YFP と CFP を group み 込 む と, the capacity of body activeness に よ っ て FRET が abate す る と exam え ら れ る. 17 year pp.47-53 に は usually の way で FRET プ ロ ー ブ の cropping を try み た が, high い FRET が sharper rate have ら れ る プ ロ ー ブ が cropping で き ず, pp.47-53 18 year は さ ら に YFP と CFP を into れ for え る, あ る い は, YFP や CFP の に before and after several ア ミ ノ acid の spacer を scions into す る な ど の change - line を っ た. FRET several の improve working rate に が recognize め ら れ た も の の remnants read aloud な が ら AT1 activeness を portrait turn す る の に very な MAC T プ ロ ー ブ は have ら れ な か っ た. Future は 2 molecular FRET な ど different な る machine sequence に よ る AT1 activeness を portrait turn を refers し を て research into め て い き た い.

项目成果

Cardiac developmental biology: from flies to humans.

• DOI: 10.2170/jjphysiol.m94
• 发表时间: 2005-10
• 期刊: The Japanese journal of physiology
• 作者: I. Shiojima;I. Komuro

The FOX03a Transcription Factor Regulates Cardiac Myocyte Size Downstream of AKT Signaling

FOX03a 转录因子调节 AKT 信号下游的心肌细胞大小

• 发表时间: 2005
• 期刊: Journal of Biological Chemistry 280
• 作者: Kawamura-T;Ono-K;Hasegawa-K et al.;Mukai Y et al.;Skurk C et al.
• 通讯作者: Skurk C et al.

Akt FOX03a signaling modulates the endothelial stress response through regulation of heat shock protein 70 expression

Akt FOX03a 信号通过调节热休克蛋白 70 表达来调节内皮应激反应

• 发表时间: 2005
• 期刊: FASEB Journal 19
• 作者: Kawamura-T;Ono-K;Hasegawa-K et al.;Mukai Y et al.;Skurk C et al.;Shiojima I et al.;Kim HS et al.
• 通讯作者: Kim HS et al.

Decreased vascular lesion formation in mice with inducible endothelial-specific expression of protein kinase Akt

• DOI: 10.1172/jci26223
• 发表时间: 2006-02-01
• 期刊: JOURNAL OF CLINICAL INVESTIGATION
• 影响因子: 15.9
• 作者: Mukai, Y;Rikitake, Y;Liao, JK
• 通讯作者: Liao, JK

Disruption of coordinated cardiac hypertrophy and angiogenesis contributes to the transition to heart failure

• DOI: 10.1172/jci24682
• 发表时间: 2005-08-01
• 期刊: JOURNAL OF CLINICAL INVESTIGATION
• 影响因子: 15.9
• 作者: Shiojima, I;Sato, K;Walsh, K
• 通讯作者: Walsh, K