生体膜コレステロール組成を感知する蛍光プローブの開発

开发感应生物膜中胆固醇成分的荧光探针

基本信息

批准号：
18651102
负责人：
竹内利行
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では,細胞内のコレステロール動態を追跡する蛍光プローブを開発し,コレステロールの機能を可視化して評価する目的で以下の課題を設定した。課題1)生体膜トラップ型プローブの開発課題2)酸性環境でエキシマー効果を出す生体膜通過型プローブの開発課題3)生体膜でリン脂質とコレステロールの会合と解離を測定するプローブの開発コレステロール本来の性質を保持したプローブとして,dansyl基の付加位置が異なる3種類のdansyl-cholesterolと,ケイ素導入,非導入2種類のpyrene-cholesterolを作成した(特願2007-075414)。Dansyl-cholesterolは親水-疎水環境に応じて蛍光スペクトルが変化し,膜コレステロール含量が少ないと長波長(緑)に,多いと短波長(青)にシフトするので蛍光発色から膜コレステロール含量を推測できることを確認した(特願2007-110515)。更にdansyl-cholesterol(20)は活性化マクロファージで生ずる脂肪滴に輸送されるが,小胞体ERに局在するエステル化酵素ACATのインヒビターSandoz58-035存在下ではその脂肪滴輸送が阻害され,ERに留まる像として観察できた。また,ケイ素を結合させたSi-pyrene-cholesterolは非Si型pyrene-cholesterolに比べて蛍光強度が3倍近く増強した(特願2007-075377)。Pyrene付加コレステロールとpyrene付加リン脂質は会合するとエキシマー効果を呈し,発光波長が長波長側にシフトした。更に,pyreneと同族のperyleneを付加したコレステロールプローブを作成し,このプローブでマクロファージを標識すると,細胞はSi-pyrene-cholesterolよりもさらに強く発光した(特許出願中)。

在这项研究中，我们开发了一种荧光探针，可跟踪细胞中的胆固醇动力学，并为可视化和评估胆固醇功能设置以下任务。 Problem 1) Development of biological membrane trap type probes 2) Development of biological membrane transmembrane type probes that produce excimer effects in acidic environments 3) Development of probes that measure the association and dissociation of phospholipids and cholesterols in biological membranes As probes that retain the original properties of cholesterol, we have created three types of dansyl-cholesterols with different positions of dansyl groups,以及两种类型的吡啶 - 胆固醇是硅引入和未引入的（日本专利应用2007-075414）。得到证实，丹氰基 - 胆固醇的荧光光谱取决于亲水性的养育环境，当膜胆固醇含量较低时，它会转移到长波长（绿色），当膜胆固醇含量较高时，它可以估计到较短的元素含量（蓝色）含量（蓝色）含量的含量含有膜酚含量（蓝色）含有膜酚含量。 2007-110515）。此外，丹氰基胆固醇（20）被转运到由活化巨噬细胞产生的脂质液滴中，但是在存在Sandoz58-035的存在下，酯化酶ACAT的抑制剂本地定位于内质网，它的脂质液滴的运输被抑制了被抑制的液滴液滴，并抑制了它的孔子。此外，与非Si-type pyrene-胆固醇相比（日本专利申请号2007-075377），硅键入的Si-pyrene-胆固醇的荧光强度增加了近三倍。当吡啶添加的胆固醇和吡里烯添加的磷脂同伴时，它们表现出精选效应，发射波长向长波长侧移动。此外，创建了带有pery烯的胆固醇探针，并用这种探针标记巨噬细胞，并标记巨噬细胞，从而导致细胞发出的光甚至比Si-pyrene-胆固醇（专利）更强。

项目成果

期刊论文数量（10）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Molecular probes for sensing the cholesterol composition of subcellular organelle membranes.

DOI：
10.1016/j.bbalip.2006.06.016
发表时间：
2006-10
期刊：
Biochimica et biophysica acta
影响因子：
0
作者：
Rong Wang;M. Hosaka;Lu Han;Hiromi Yokota-Hashimoto;M. Suda;D. Mitsushima;S. Torii;T. Takeuchi
通讯作者：
Rong Wang;M. Hosaka;Lu Han;Hiromi Yokota-Hashimoto;M. Suda;D. Mitsushima;S. Torii;T. Takeuchi

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