抗糖脂質モノクローナル抗体のイヌ型抗体化とメラノーマ治療への応用

犬抗糖脂单克隆抗体的形成及其在黑色素瘤治疗中的应用

基本信息

批准号：
18658123
负责人：
大橋和彦
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18658123/
关键词：
糖脂質メラノーマメノラーマ

项目摘要

糖脂質を標的分子とした新規の抗腫瘍療法を開発することを目的として研究として研究を行った。今年度は、平成18年度に調製し、腫瘍細胞、特にイヌ由来メラノーマ細胞株との反応性を確認した各種糖脂質に対するマウスモノクローナル抗体(MAb)パネルのうち、細胞株に広範に反応した抗GM3 MAb(クローンNo.2-14)について、さらに解析を行った。その結果、このクローンMAbは、非常に多くのメラノーマ細胞株に対して試験管内で細胞傷害性を有していることを見出した。また種々のメラノーマ可移植性細胞株を皮下に移植したヌードマウスを用いた治療試験でも、MAbの連続投与により、移植腫瘍の生育が抑制されることが示された(ただし、対照群と治療群の間に統計学的有意差は検出されなかった)。以上より、in vivoにおいても抗GM3 MAbが抗腫瘍効果を発揮できることがマウスモデルで証明された。昨年度に、抗GM3 MAb(クローンNo.2-14)の抗原結合部位である超可変領域(抗原特異性決定部位)の塩基配列を決定し、イヌ型抗体化を目指して遺伝子発現ベクターへ挿入するため、遺伝子カセットをH鎖・L鎖それぞれにおいて作成したが、今年度は、さらに組み換えイヌ型抗糖脂質MAbの臨床応用を目的として、作成した遺伝子カセットをH鎖・L鎖のバキュロウイルス発現系を用いた組み換えイヌ型抗GM3 MAbの大量発現系の樹立を試みた。しかしながら、その発現量は、あまり高くないことが判明した。発現したL鎖とH鎖について、そのGM3との結合活性を確認したが、単独では結合せず、組み換えL鎖およびH鎖の会合した分子を調製する必要性が示唆された。今後、spacerなどでL鎖およびH鎖を結合した遺伝子を調製し共発現させる系を検討する。

这项研究的目的是使用糖脂作为靶分子开发新型抗肿瘤疗法。今年，我们进一步分析了抗GM3 MAB（第2-14号克隆），该抗GM3 MAB（克隆）对小鼠单克隆抗体（MAB）面板中的细胞系进行了广泛反应，并在2006年制备了各种糖脂，并证实了它们对肿瘤细胞的反应性，尤其是狗源性疾病瘤细胞。结果，我们发现该克隆的mAb在体外对大量黑色素瘤细胞系具有细胞毒性。此外，使用裸小鼠与各种黑色素瘤移植细胞系的治疗研究表明，连续的mAB抑制了移植肿瘤的生长（尽管对照组和治疗组之间未检测到统计学上的显着差异）。从以上，在小鼠模型中已经证明了抗GM3 mAb甚至在体内也会发挥抗肿瘤作用。去年，我们确定了抗GM3 MAB的抗原结合位点（克隆第2-14号）的抗原结合位点（克隆第2-14号），并在H和L链中创建了一个基因表达载体中的基因盒，其目的是成为罐头抗体抗体。但是，今年，我们还试图使用H和L链杆状病毒表达系统建立重组犬抗GM3 MAB的大规模表达系统，以临床应用重组犬抗糖脂抗糖脂MAB。但是，发现表达水平不是很高。对于表达的L和H链证实了GM3的结合活性，但它本身并非绑定，这表明有必要准备使用相关的重组L和H链的分子。将来，我们将调查使用隔离器等与L和H链结合的基因的系统。