マレック病腫瘍化におけるアポトーシス関連及び癌抑制遺伝子の発現動態の解析

马立克氏病肿瘤发生过程中凋亡相关基因和抑癌基因的表达动态分析

基本信息

批准号：
09760262
负责人：
大橋和彦
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09760262/
关键词：
マレック病アポトーシス bcl-2

项目摘要

マレック病ウイルス(MDV)の腫瘍化における発癌抑制遺伝子やアポトーシス関連遺伝子の役割を解析するため、特にbcl-2、bcl-x遺伝子に関して検討した。そしてこれまで、1)マレック病腫瘍株化細胞、MSB1、MTB1やMDV感染鶏由来CD4^+T細胞においてはアポトーシス抑制遺伝子であるbcl-2遺伝子の発現が抑制されていること、2)しかしbcl-2同様にアポトーシスを抑制するbcl-xLが代償的にMSB1.MTB1では発現していることが判明した。これらのことはMDVによる腫瘍化(少なくとも腫瘍化の維持)にはbcl-2よりもbcl-xL遺伝子の発現がより大きく寄与していることを示唆している。しかしながら、可移植性マレック病腫瘍株化細胞、RP1、HP1等ではbcl-2遺伝子の発現が認められ、bcl-2遺伝子が腫瘍の悪性化(腫瘍株の可移植性を指標として)に関与していることも示唆された。そこでbcl-2遺伝子の可移植性に対する役割を検討した。PCR法にて鶏bcl-2α遺伝子cDNAをクローニングし、ネオマイシン耐性マーカーを持つ真核細胞発現ベクター(pCIneo)に組み込み、bcl-2遺伝子を発現していないMSB1細胞に遺伝子導入してbcl-2遺伝子発現MSB1細胞を樹立した。bcl-2遺伝子の発現はノーザンブロット法にて確認した。そして現在、この細胞をマレック病感受性鶏の翼下皮下に接種して可移植性が付与するかどうかを検討している。さらにMDV感染鶏由来CD4^*T細胞における他のアポトーシス関連遺伝子、DAD1、ITA、p58等の発現をノーザンブロット法で検討したが、対照鶏との間に有意な差は認められなかった。今後さらに腫瘍株化細胞における発現を検討する。

为了分析爆镜基因和与凋亡相关的基因在Malek病毒肿瘤（MDV）中的作用，我们专门检查了BCL-2和BCL-X基因。迄今为止，已经发现1）抑制基因Bcl-2基因的凋亡的表达在CD4^+T细胞中抑制了来自Malek疾病肿瘤细胞，MSB1，MTB1和MDV感染的鸡和2）的表达，但是，已经发现BCl-XL抑制了凋亡。这些表明，BCL-XL基因的表达比BCl-2比MDV更大的肿瘤发生（至少维持肿瘤发生）。然而，在移植的Malek肿瘤细胞系，RP1，HP1等中观察到Bcl-2基因的表达，这表明Bcl-2基因参与肿瘤恶性转化（表明肿瘤线作为指示器）。因此，我们研究了Bcl-2基因在移植性中的作用。将鸡Bcl-2α基因cDNA通过PCR克隆，并与新霉素耐药标记物掺入真核细胞表达载体（PCINEO）中，然后转染到MSB1细胞中，该细胞未表达Bcl-2基因以建立表达BCL-2基因的MSB1细胞。通过北印迹证实了Bcl-2基因的表达。目前，我们正在考虑是否可以将这些细胞接种到Marek对疾病敏感鸡的副翼皮肤中，以赋予移植性。此外，通过Northern斑点检查了其他与MDV感染的鸡的CD4^*T细胞中其他与凋亡相关的基因，DAD1，ITA，P58等的表达，但在细胞和对照鸡之间没有发现显着差异。将来将进一步研究肿瘤细胞系中的表达。