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パラニューロン特異的なCa-シグナル関連蛋白のクローニングとそ現局在について

神经元旁特异性 Ca 信号相关蛋白的克隆和定位

基本信息

批准号：
06670001
负责人：
近藤尚武
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

カルシウムとカルモジュリアンに依存性の蛋白質リン酸化酵素のうちで小脳顆粒細胞に特異的な分子がCaMキナーゼIV型として見出され、その遺伝子クローニングが他者により報告された。本研究ではこの分子の遺伝子をさらに解析した結果、既報の分子の3′-翻訳領域にアミノ酸28個が新たに付加した分子を発見してCaMキナーゼβ型と名づけ、既報のものをそのα型として区別した。次いで、両型に共通の翻訳領域で159個のアミノ酸からなるペプチドを大腸菌に遺伝子をもとに発現させ、ウサギに免疫させて特異抗体を得た。免疫ブロット法によりこの得られた抗CaMキナーゼIV抗体は、分子量約61と63kDの2本帯を示した。この特異抗体を用いて先ず中枢神経全体を、そして次に末梢神経節といくつかのパラニューロンを免疫組織化学的に検索して、CaMキナーゼIVの局在を精査した。中枢神経系では、小脳顆粒細胞は勿論のこと前脳から脊髄にわたって中型と小型ニューロンのほとんど全てが免疫陽性であり、免疫陽性産物はそれぞれのニューロンの核に局在して見出された。小脳プルキニエ細胞や脳幹における運動神経核の大型ニューロンは免疫陰性であった。この所見は我々が既に報告した遺伝子組織化学的所見と完全に一致した。末梢でのCaMキナーゼIV免疫反応は、交感・副交感神経節とおよび腸壁内神経節のほとんど全てのニューロンと知覚神経節の中・小型ニューロンに見出され、その核にのみ局在していた。軸索には明瞭な免疫反応は検出されなかった。さらにパラニューロン代表である副腎髄質の全てのクロム親和細胞が免疫陽性を示し、免疫反応物はやはり核に局在していた。その他、頸動脈小体主細胞でもその核が免疫陽性を示した。以上の所見から、中・小型ニユーロンおよびパラニューロン核におけるなんらかの情報伝達にCaMキナーゼIVが重要な機能を担っていることが強く示唆された。今後、パラニューロンの分泌亢進や抑制および知覚刺激等の実験条件でこの分子の発現変動を調べる予定である。

The protein kinase enzyme dependent on the protein kinase is a small granule cell-specific molecule, CaM, type IV and other molecules. In this study, we analyzed the molecular structure of these molecules and found that 28 new molecules were found in the 3′-domain of the reported molecules. 159 of them were found in common with E. coli, and 159 of them were found in common with E. coli. Anti-CaM IV antibody was obtained by immunizing with a molecular weight of about 61 kD and a molecular weight of 2 kD. This specific antibody was used to detect the central nervous system as a whole, and the peripheral nervous system was examined by immunohistochemistry. The central nervous system is composed of small and medium-sized granular cells, which are immune positive and immune positive products. Small cells, stem cells, large cells, negative cells The findings are consistent with those reported in histochemistry. The immune response of the peripheral CaM cells to the sympathetic and parasympathetic neurons, and the intestinal wall neurons, and the immune response of the peripheral CaM cells, and the immune response of the intestinal wall neurons, and the immune response of the peripheral CaM cells, and the immune The axons are clear, the immune response is negative. In addition, the immune response of the immune system is expressed in the immune system, and the immune response is expressed in the nucleus. The main cells of the carotid body and other organs were found to be immunopositive. The above findings show that the core of the medium and small size of the network is very important for the development of the network. In the future, the production of the molecule will be regulated under the conditions of hypersecretion, inhibition and cognitive stimulation.