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HIV-1Vpr蛋白と相互作用する細胞内因子の同定

与 HIV-1Vpr 蛋白相互作用的细胞内因子的鉴定

基本信息

批准号：
11161234
负责人：
間陽子
金额：
$ 1.34万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

HIV-1 Vpr蛋白のG2期arrest、アポトーシス、さらには核移行等の機能の発現機構を解明するために、Vpr蛋白と特異的に相互作用する細胞内蛋白を単離を試みている。1)強いアポトーシス活性を持つVpr蛋白のC末端欠失変異体の解析G2期arrest能を完全に消失しているが、G1期arrest能と強いアポトーシス活性を獲得したVpr蛋白のC末端欠失変異体を見いだし、G2期arrestとアポトーシスは異なる経路で発揮される可能性を示した。同様に、野生型VprもG2期arrestとは異なる機序によるアポトーシス誘導能を有する事を明らかにした。可溶化Vpr蛋白を非感染細胞に添加するとアポトーシスが誘導される事は既に報告されていたが、endogenousなVpr蛋白が細胞をアポトーシス出来るという最初の報告である。2)yeast two-hybrid法によるHIV-1 Vpr結合因子の検索Vpr蛋白によるアポトーシスおよびG2期arrestの発現機序を解明するために、これらの機能に関与するVpr結合細胞内因子を同定を試みた。野生型Vprと同様の発現能、核膜・核への局在能を保持しているが細胞増殖抑制能を完全に消失している、Vpr17-81変異体をbaitとして、yeast two-hybrid法を行った。UNG、HHR23Aを含む5種類の既知の蛋白質と、6種類の未知の蛋白質をコードする遺伝子が同定された。この中で、HHR23Aについては、C末端側UBAドメインがVprとの結合に重要である事、さらに、この結合にはVpr蛋白のα-helix2ドメインの67位Leuおよび74位Ileの各アミノ酸の保存が重要であることを証明した。3)Vpr蛋白とImportinα,βとの相互作用の解析Vpr蛋白の重要な機能である核局在化には、核局在化シグナルとして機能しうる2つのα-helixドメインが共に重要であることを明らかにした。In vitro translationで作製した野性型および変異型Vpr蛋白を用いて、pulldown assayにおいてGST融合型Impα及びβと結合能を解析した。その結果、Vpr蛋白はH2ドメインを介してImpα及びβと相互作用している可能性が示唆された。

HIV-1 Vpr Protein G2 Arrest, Transcription, Nuclear Migration, and Other Functions of the Mechanism of Expression of Vpr Protein and Specific Interactions with Intracellular Protein 1)G2 arrest activity is completely lost, G1 arrest activity is acquired, and C-terminal deletion of Vpr protein is possible. The same, wild-type Vpr G2 arrest and reverse mutation mechanism, the same as the wild type Vpr G2 arrest and reverse mutation mechanism. Vpr protein was added to non-infected cells, and the results were initially reported. 2)The past two-hybrid method was used to investigate the function of Vpr binding factor in HIV-1 Vpr protein and its expression in G2 arrest. Wild type Vpr and isoform activity, nuclear membrane and nuclear domain activity are maintained, cell proliferation inhibition activity is completely eliminated, Vpr17-81 variant is baited, and yeast two-hybrid method is implemented. UNG and HHR23A contain 5 known proteins and 6 unknown proteins. In this case, HHR23A is also important for the preservation of Vpr protein α-helix2 and 67-position Leu and 74-position Ile. 3) Analysis of the interaction between Vpr protein and Importinα,β The important function of Vpr protein is to analyze the interaction between Vpr protein and Importin α, β. In vitro translation, the wild type and variant Vpr proteins were analyzed by pulldown assay, GST fusion type Impα and β binding energy. As a result, Vpr protein has the potential to interact with H2 molecules.