ヒト樹状細胞におけるHIV－1複製を制御する宿主因子に関する研究

人类树突状细胞中控制HIV-1复制的宿主因素的研究

• 批准号: 11F01216
• 负责人: 間 陽子
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 2012
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11F01216/
• 关键词: HIV-1Vpr; 非分裂細胞; Macrophage; 樹状細胞; マイクロアレイ法; interferon; UBE2C遺伝子; HIV-1感染; 樹状細胞(DC); Macrophage指向性ウイルス; adenovirusベクター; interferon誘導遺伝子; 細胞周期停止

ヒト免疫不全ウイルス1型(HIV-1)の特徴の一つがアクセサリー遺伝子を有する事である。特に、アクセサリー蛋白質Vprは、核移行、細胞周期のG2期停止、アポトーシスおよび免疫抑制などの多機能性を発揮することで、HIV-1複製に大きく寄与している。本研究では非分裂細胞におけるVprの未知の機能を解明するために、Vpr発現adenovirusベクターあるいはR5 tropic virusとそのVpr欠損ウイルスをMacrophageと樹状細胞に感染させ、Vprによって発現が変動する宿主遺伝子をマイクロアレイ法により網羅的に解析した。昨年度は、MacrophageにおけるHIV感染において、Vpr発現によりinterferon誘導遺伝子、IFIT1,T2,MX2などの発現が低下することを明らかにした。一方、Vpr発現アデノウイルスベクターを用いた系では、これらの遺伝子の発現が上昇することを見出した。樹状細胞においても同様の傾向が認められた。そこで、本年度は引き続いてreal time PCRを行ない、Vpr発現によりIFN誘導遺伝子の発現上昇が確認されることを確認した。さらに、Western Blottingにおいて蛋白の発現レベルを解析した結果、STAT1,TRAIL,IRF7,ISG20の発現の上昇とSTAT1のリン酸化も増強されていることを立証した。以上の結果から、Vpr単独発現はType I interferonのJAK-STAT pathwayの活性化に関与することが示唆された。続いて、Ubiquitin結合酵素の一つであるUBE2C遺伝子の発現がVprによって低下することが見出された。Real time PCRによって、感染後1,3および10日目にVprの発現によってUBE2C遺伝子抑制されることが確認された。そこで、UBE2Cをon-target siRNAによってノックダウンして、flow cytometryによって細胞周期の解析を行った。その結果、コントロールsiRNAに比べてUBE2C特異的siRNAを行った細胞はVprのG2期arrest効果を約10%上昇していた。さらに、ノックダウンすることにHIV-1感染における意義を解析し手いる。さらに、IFIT1,IFIT2およびIFIT3のHIV-1感染における役割を明らかにするために、IFIT1,IFIT2およびIFIT3のsiRNAによってノックダウン後に感染実験を行った。

ヒ ト immune insufficiency ウ イ ル ス type 1 (HIV - 1) の 徴 の a つ が ア ク セ サ リ ー heritage 伝 son を す る matter で あ る. に, ア ク セ サ リ ー protein Vpr は の G2, nuclear migration, cell cycle stop, ア ポ ト ー シ ス お よ び immunosuppression な ど の more functional を 発 swing す る こ と で, HIV - 1 copy に き く send し て い る. This study で は not splinter cell に お け る Vpr の function of unknown の を interpret す る た め に, Vpr 発 now adenovirus ベ ク タ ー あ る い は R5 tropic Virus get と そ の Vpr owe loss ウ イ ル ス を Macrophage と dendritic cells に infection さ せ, Vpr に よ っ て 発 が now - move す る host legacy 伝 son を マ イ ク ロ ア レ イ method に よ り snare に resolution し た. Yesterday annual は, Macrophage に お け る HIV infection に お い て, Vpr 発 now に よ り interferon induced heritage 伝, IFIT1, T2, MX2 な ど の 発 now low が す る こ と を Ming ら か に し た. One party, the Vpr 発 now ア デ ノ ウ イ ル ス ベ ク タ ー を with い た department で は, こ れ ら の heritage 伝 son の 発 now rising が す る こ と を see out し た. Dendritic cells にお にお て て にお similar <s:1> tend to が recognize められた. そ こ で, this year's は き 続 い て line real time PCR を な い, Vpr 発 now に よ り IFN induced heritage 伝 son の 発 now rising が confirm さ れ る こ と を confirm し た. さ ら に, Western Blotting に お い て protein の 発 now レ ベ ル を parsing し た results, STAT1, TRAIL, IRF7, ISG20 の 発 now rising の と STAT1 の リ ン acidification も raised strong さ れ て い る こ と を testification し た. The above <s:1> results ら ら and Vpr単 independently show the に association of <s:1> Type I interferon <s:1> JAK-STAT pathway <s:1> activation and する された とが とが suggest された. 続 い て, Ubiquitin is combined with a enzyme の つ で あ る UBE2C heritage 伝 son の 発 now が Vpr に よ っ て low す る こ と が shows さ れ た. Real time PCR に よ っ て, infection after 1, 3 お よ び 10 mesh に Vpr の 発 now に よ っ て UBE2C heritage 伝 child restrain さ れ る こ と が confirm さ れ た. そ こ で, UBE2C を on - target siRNA に よ っ て ノ ッ ク ダ ウ ン し て, flow cytometry に よ っ て cell cycle line analytical を の っ た. そ の results, コ ン ト ロ ー ル siRNA に than べ て UBE2C specific siRNA を line っ た cells は Vpr の G2 arrest unseen fruit を about 10% し て い た. Youdaoplaceholder0, ノッ ダウ ダウ ダウ する とに とにHIV-1 infection における significance を analysis さらに hand る る. さ ら に, IFIT1 IFIT2 お よ び IFIT3 の infected with HIV - 1 に お け る "を cut Ming ら か に す る た め に, IFIT1 IFIT2 お よ び IFIT3 の siRNA に よ っ て ノ ッ ク ダ ウ ン に infection after be 験 を line っ た.

项目成果

HIV-1 Vpr activates type I interferon signaling pathway in macrophages and related with interleukin-1 (IL-1) pathway in dendritic cells

HIV-1 Vpr 激活巨噬细胞中的 I 型干扰素信号通路并与树突状细胞中的白细胞介素 1 (IL-1) 通路相关

• 发表时间: 2011
• 作者: 薛光愛;Muhammad A Zahoor;間陽子
• 通讯作者: 間陽子

Synthesis and biological evaluation of hematoxylin derivatives as a Novel class of anti-HIV-1 reagents

新型抗HIV-1试剂苏木精衍生物的合成及生物学评价

• 发表时间: 2012
• 期刊: Bioorg.Med.Chem.Lett.
• 作者: Hideki Ishii;Hiroko Koyama;Kyoji Hagiwara;Tomoyuki Miura;Guangai Xue;Y Hashimoto;G Kitahara;Yoko Aida;M Suzuki
• 通讯作者: M Suzuki

The 5' flanking region and intronl of the bovine prion protein gene (PRNP) are responsible for negative feedback regulation of the prion protein

牛朊病毒蛋白基因（PRNP）的5侧翼区和内含子负责朊病毒蛋白的负反馈调节

• 发表时间: 2012
• 期刊: PLoS ONE
• 影响因子: 3.7
• 作者: Guangai Xue;Yoko Aida;Takashi Onodera;Akikazu Sakudo
• 通讯作者: Akikazu Sakudo