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ヒト免疫不全ウイルスI型Vpr蛋白質のウイルス複製に果たす役割の解明

阐明人类免疫缺陷病毒 I 型 Vpr 蛋白在病毒复制中的作用

基本信息

批准号：
10F00219
负责人：
間陽子
金额：
$ 0.64万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2011
项目状态：
已结题

项目摘要

HIV-1Vprのマクロファージにおける未知の機能を解明するためにアデノウイルスベクターを用いて、Vpr遺伝子を非分裂細胞であるマクロファージに導入して、Microarray analysis.とProteomic profilingを行った。感染を確認するために蛍光タンパク質ZsGreenlをIRESプロモーターの下流に、Flag融合VprをCMVプロモーターの下流に連結したVpr発現アデノウイルスベクターを構築し、293T細胞に導入してストックウイルスを作製した。それをHeLa細胞に感染させたところ、Vpr、ZsGreen1およびFlagの発現及びVprの核局在と細胞周期G2期停止能を示した。健常人の末梢血単核球からCD14陽性T細胞を分画して、マクロファージ分化因子で最終分化マクロファージを準備して、Vpr発現アデノウイルスおよびZsGreen1発現アデノウイルスを感染させ、48時間後にRNAを抽出して、Human Genome U133 plus 2.0 arrayチップを使用してMicroarray analysis.を行った。Innate Immune Response、Immune Response、Chemotaxis、Stress Response、Response to VirusおよびSignal transductionに関連する570個の遺伝子を同定した。特にType IFNs signalling pathwayに関連する遺伝子が多く見つかった。次に、Vpr結合細胞内因子を同定するために、Vpr発現アデノウイルスおよびZsGreen1発現アデノウイルスを感染させた最終分化マクロファージの細胞抽出液から、抗Flag抗体を用いて、Vpr結合タンパク質を免疫沈降して、電気泳動を行った。現在、Vpr特異的に検出されたバンドを切り出して、LC-MS analysisで解析中である。

HIV-1 Vpr gene analysis. Proteomic profiling. Microarray analysis. Infection confirmation: Vpr detection: Vpr detection: Vpr detection HeLa cells infected with Vpr, ZsGreen1, Flag and Vpr were able to stop at G2 phase of the cell cycle. CD14-positive T cells were isolated from peripheral blood lymphocytes of healthy individuals, and the final differentiation factors were prepared for Vpr detection. RNA was extracted 48 hours later and Human Genome U133 plus 2.0 array was used for Microarray analysis. Innate Immune Response, Immune Response, Chemotaxis, Stress Response, Response to Virus, and Signal Transduction are all related to each other. Special Type IFNs signaling pathway Secondary, Vpr binds to intracellular factors, and Vpr detects the presence of Vpr and ZsGreen1. Vpr detects the presence of Vpr and ZsGreen1, and Vpr detects the presence of Vpr in the final differentiation of Vpr. Anti-Flag antibodies are used. Vpr binds to proteins, immunoprecipitates, and electrophoresis. Now, Vpr-specific detection is in progress, LC-MS analysis is in progress.