造血細胞における細胞老化克服遺伝子の単離と機能解析

造血细胞克服细胞衰老的基因的分离和功能分析

• 批准号: 18659281
• 负责人: 松村 到
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659281/
• 关键词: 細胞老化; Ras; PML; Gene-Trap法

従来は新規機能遺伝子をクローニングする際には解析対象の細胞からcDNAの発現ライブラリーを作成し、標的とする細胞に導入する発現クローニング法が用いられてきた。cDNAライブラリーの作成は煩雑であるのみでなく、解析を行う細胞がごく少数しか単離できない場合には、質の高いcDNAライブラリーの作成が極めて困難であった。これらの問題点を克服するために、本研究では、cDNAライブラリーを導入する代わりに、テトラサイクリン除去(Tet-off)により遺伝子発現を誘導するプロモーターとERM Tagのついたキメラ蛋白として遺伝子発現を起こさせるためのスプライスドナー(SD)の発現カセットが組み込まれたERMレトロベクターを用いて内因性の遺伝子の発現をランダムに誘導することのできる新規Gene-Trap法を用いている。活性型Rasは癌遺伝子であるが、マウスの造血幹/前駆細胞(Lin^-Sca-1^+)細胞や胎児線維芽細胞に活性型Rasを導入するとアポトーシスや早期細胞老化(premature senescene)が誘導される。本研究では活性型Rasを発現するレトロウイルスと上述のGene-Trapベクターをこれらの細胞に感染させ、IL-3などのサイトカイン存在下あるいは非存在下で培養を続け、Rasと協調して白血病化、癌化を引き起こす遺伝子や不死化を誘導する遺伝子の単離を試みた。平成18年度の研究によって、RasとGene-Trapベクターを同時に導入した細胞から、サイトカイン非存在下で増殖し続ける白血病クローンを単離することに成功した。また、PMLとGene-Trapベクターを同時に導入した細胞から、PMLによる細胞老化を免れたクローンの単離にも成功した。これらのクローンにおいてGene-Trapベクターによって発現が誘導された遺伝子の単離を完了した。

In the future, the new functional gene expression method will be used to analyze the expression of cDNA in the target cell. The production of cDNA fragments is extremely difficult in a few cases, and the production of cDNA fragments is extremely difficult in many cases. This study is aimed at overcoming the problem of cDNA translation. The new Gene-Trap method is used to detect the presence of ERM Tag and to induce the presence of ERM tag. Active Ras is introduced into hematopoietic stem/progenitor cells (Lin^-Sca-1^+) cells in the fetal line, and early cell aging is induced. In this study, the expression of active Ras and the Gene-Trap gene described above were tested in the presence or absence of IL-3, cell infection, cell culture, Ras coordination, leukemia, carcinogenesis, induction, and inactivation. In 2018, we successfully introduced Ras Gene-Trap into leukemia cells without cell culture. PML and Gene-Trap were successfully introduced into the cells and isolated from the cells. The Gene-Trap is the first time that a gene has been detected.

项目成果

STAP-2 regulates c-Fms/M-CSF receptor signaling in murine macrophage Raw 264.7 cells

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2007.05.030
• 发表时间: 2007-07-06
• 期刊: BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS
• 影响因子: 3.1
• 作者: Ikeda, Osamu;Sekine, Yuichi;Matsuda, Tadashi
• 通讯作者: Matsuda, Tadashi

The scaffolding adapter Gab2, via Shp-2, regulates kit-evoked mast cell proliferation by activating the Rac/JNK pathway

• DOI: 10.1074/jbc.m603742200
• 发表时间: 2006-09-29
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Yu, Min;Luo, Jincai;Gu, Haihua
• 通讯作者: Gu, Haihua

Correlation between promoter hypermethylation of GSTP1 and response to chemotherapy in diffuse large B cell lymphoma

• DOI: 10.1007/s00277-007-0299-1
• 发表时间: 2007-08-01
• 期刊: ANNALS OF HEMATOLOGY
• 影响因子: 3.5
• 作者: Nakamichi, Itsuko;Tomita, Yasuhiko;Aozasa, Katsuyuki
• 通讯作者: Aozasa, Katsuyuki

The tetraspanin CD9 modulates epidermal growth factor receptor signaling in cancer cells

• DOI: 10.1002/jcp.21384
• 发表时间: 2008-07-01
• 期刊: JOURNAL OF CELLULAR PHYSIOLOGY
• 影响因子: 5.6
• 作者: Murayama, Yoko;Shinomura, Yasuhisa;Hayashi, Norio
• 通讯作者: Hayashi, Norio

Checkpoint-apoptosis uncoupling in human and mouse embryonic stem cells: a source of karyotypic instability

人和小鼠胚胎干细胞中的检查点凋亡解偶联：核型不稳定的根源

• 发表时间: 2007
• 期刊: Blood 109
• 作者: Mantel C;et. al.
• 通讯作者: et. al.