無血清再集合培養系を用いたマウスES及びヒト骨髄間葉系幹細胞からの顎骨・歯胚誘導

使用无血清再增殖培养系统诱导小鼠 ES 和人骨髓间充质干细胞的颌骨和牙胚

• 批准号: 18659598
• 负责人: 岡本 哲治
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659598/
• 关键词: マウスES細胞; 骨髄幹細胞; アフリカツメガエル; TGFβ; アクチビン; 軟骨誘導; 顎顔面領域; 無血清培養

1.19年度の研究成果:ヒト骨髄由来幹細胞(HBMSC)の未分化性を長期に維持する無血清培養条件を確立した。方法:骨折あるいは顎変形症手術時に患者よりインフォームドコンセントを行い、承諾書を得た後、顎骨より骨髄細胞を採取した。我々がすでに報告した、マウス胚性幹(ES)細胞の未分化性と多分化能を維持可能な無血清培地ESF7培地を基礎培地として、種々の因子の添加し、HBMSCの未分化状態を維持する培養条件を検討した。結果:ESF7培地にFGF-2を加えることによりHBMSCの長期無血清培養が可能であることが明らかとなった。また、同培地を用いることにより10代以上に渡って継代培養が可能であった。未分化マーカーであるSH-1,-2,CD13,34,49,117,140の発現を、これらの抗体を用いて免疫組織学的解析法ならびにFlow cytometory(現有備品)により検討した結果、これらマーカータンパクを発現していた。また、nanog,やアルカリフォスファターゼ活性も長期にわたり陽性を示した。2.ヒト骨髄幹細胞から位置情報をもつ骨の誘導条件を確立した。上記で決定した無血清培養条件下に,未分化な骨髄幹細胞に、nodal,BMP2,4,7,FGF-1,2,7,10を添加し、スミロン・スフェロイドプレートに播種してスフェロイドを形成させ、10日間培養を行い、4%パラフォルムアルデヒドで固定、あるいは、RNAを抽出し、組織学的検討及びDNAマイクロアレイ解析を行った結果、nodal、およびBMP4により顎顔面の位置情報を示す遺伝子発現を認めた。未分化な骨髄幹細胞をnodal、あるいはBMP4,で処理した細胞群を混合し、スミロン・スフェロイドプレートに播種してスフェロイドを形成させ、10日間培養を行い、組織学的検討およびRNAを抽出した。4%パラフォルムアルデヒドで固定したスフェロイドのパラフィン切片を作製し、組織学染色(HE染色、アルシアンブルー・PAS二重染色、アニザリンレッド染色)を行い、誘導される組織を解析した。遺伝子発現の解析結果:骨・軟骨のマーカー遺伝子であるRunx2,Sox5,6,9,オステオネクチン,オステオポンチン。頭部マーカー遺伝子であるOTX-2,Msx1,Msx2,goosecoide,顎顔面領域特異的遺伝子であるHoxa2,Distal-less 1-4,Neural crestマーカー遺伝子であるAP2,Snail,Twist、歯のマーカー遺伝子であるアメロジェニン遺伝子の発現を認めた。

1.19 Annual <s:1> research achievements :ヒト bone spine-derived stem cells (HBMSC) <s:1> undifferentiated を long-term に maintenance する serum-free culture conditions を establishment of た た. Methods: fracture あ る い は jaw - form disease surgery patients with に よ り イ ン フ ォ ー ム ド コ ン セ ン ト を い, inter alia を after た, jaw よ り bone marrow cells を し た. I 々 が す で に report し た, マ ウ ス embryonic stem (ES) cells の と more undifferentiated sex differentiation can を maintain serum-free culture may な ESF7 petty を based the petty と し て, kind of 々 の factor の add し, HBMSC の undifferentiated state を maintain す る culture conditions を beg し 検 た. Results: ESF7 petty に FGF - 2 を plus え る こ と に よ り HBMSC の long-term serum-free culture が may で あ る こ と が Ming ら か と な っ た. Youdaoplaceholder0, in the same culture place を, it is possible to cultivate が through って継 generations of に for more than 10 generations or more であった. Undifferentiated マ ー カ ー で あ る SH - 1, 2, CD13, 34,49,117,140 の 発 を, こ れ ら を の antibody with い て histologic analytical method of immune な ら び に Flow cytometory (spare) existing に よ り beg し 検 た results, こ れ ら マ ー カ ー タ ン パ ク を 発 now し て い た. Youdaoplaceholder0, nanog,やア また カリフォスファタ カリフォスファタ また ゼ ゼ ゼ active また long-term にわた <s:1> を positive を shows た た. 2. Youdaoplaceholder0 bone marrow stem cells を ら location information を を ヒト the bone <s:1> induction conditions を establishment た た. Written で decided し た に serum-free culture conditions, undifferentiated な に bone marrow stem cells, the nodal, BMP2, 4, 7, FGF - 1,2,7,10 を add し, ス ミ ロ ン · ス フ ェ ロ イ ド プ レ ー ト に seeding し て ス フ ェ ロ イ ド を form さ せ 4%, 10 day training line を い, パ ラ フ ォ ル ム ア ル デ ヒ ド で fixation, あ Pump, RNA を る い は し, histological beg and び 検 DNA マ イ ク ロ ア レ イ parsing line を っ た results, nodal, お よ び BMP4 に よ り jaw facial の location intelligence を shown す heritage 伝 son 発 を now recognize め た. Undifferentiated な bone marrow stem cells を nodal, あ る い は BMP4, で 処 Richard し た cells を mixed し, ス ミ ロ ン · ス フ ェ ロ イ ド プ レ ー ト に seeding し て ス フ ェ ロ イ ド を form さ せ, 10 day training line を い, histological beg お 検 よ び RNA を spare し た. 4% パ ラ フ ォ ル ム ア ル デ ヒ ド で fixed し た ス フ ェ ロ イ ド の パ ラ フ ィ ン し the slice を cropping, histological staining, HE staining, ア ル シ ア ン ブ ル ー PAS double staining, ア ニ ザ リ ン レ ッ ド dyeing) を い, induced さ れ る organization を parsing し た. Posthumous son 伝 発 is の analytic results: bone, cartilage の マ ー カ ー heritage 伝 son で あ る Runx2, Sox5, 6, 9, オ ス テ オ ネ ク チ ン, オ ス テ オ ポ ン チ ン. Head <s:1> カ カ カ 伝 伝 subunits であるOTX-2,Msx1,Msx2,goosecoide, maxillofacial domain specific 伝 subunit であるHoxa2,Distal less 1-4,Neural Crest マ ー カ ー posthumous son 伝 で あ る AP2, q, Twist, 歯 の マ ー カ ー posthumous son 伝 で あ る ア メ ロ ジ ェ ニ ン heritage 伝 son の 発 を now recognize め た.

项目成果

:Defined Medium for Human ESCell Culture

：人 ESCell 培养的限定培养基

Induction of alpha2-antiplasmin inhibits E-cadherin processing mediated by the plasminogen activator/plasmin system, leading to suppression of progression of oral squamous cell carcinoma via upregulation of cell cell adhesion.

α2-抗纤溶酶的诱导抑制由纤溶酶原激活剂/纤溶酶系统介导的E-钙粘蛋白加工，通过上调细胞粘附来抑制口腔鳞状细胞癌的进展。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Oncol Rep. Feb;17(2)
• 作者: Hayashido Y;Hamana T;Ishida Y;Shintani T;Koizumi K;Okamoto T
• 通讯作者: Okamoto T

Radiation dose estimation by tooth enamel EPR dosimetry for residents of Dolon and Bodene

• DOI: 10.1269/jrr.47.a47
• 发表时间: 2006-02-01
• 期刊: JOURNAL OF RADIATION RESEARCH
• 影响因子: 2
• 作者: Zhumadilov, Kassym;Ivannikov, Alexander;Hoshi, Masaharu
• 通讯作者: Hoshi, Masaharu

Constitutive ActivatingMutation of the FGFR3b in Oral Squamous Cell Carcinomas-Reply to the letter to the editor.

口腔鳞状细胞癌中FGFR3b的组成型激活突变-给编辑的信的回复。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Int J Cancer May 1;120(9
• 作者: Zhang;Y.;Hiraishi;Y.;Okamoto;T.他
• 通讯作者: T.他

Immunohistochemical expression of heparin-binding protein 17/fibroblast growth factor-binding protein-1 (HBp17/FGFBP-1) as an angiogenic factor in head and neck tumorigenesis.

• DOI: 10.3892/or.17.3.591
• 发表时间: 2007-03
• 期刊: Oncology reports
• 影响因子: 4.2
• 作者: Shahanaz Begum;Yan Zhang;T. Shintani;S. Toratani;J. Sato;T. Okamoto