TRECK肝炎モデルマウスを用いたヒト肝機能をもつマウスの作製

使用 TRECK 肝炎模型小鼠产生具有人类肝功能的小鼠

• 批准号: 19650107
• 负责人: 河野 憲二
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Nara Institute of Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19650107/
• 关键词: 移植・再生医療; 応用動物; 細胞・組織; ジフテリア毒素

(1)昨年度に引き続き、eEF2(G717R)cDNAをヒト由来培養細胞にトランスフェクトし、ジフテリア毒素(DT)に対する耐性度を標識アミノ酸の取り込みにより調べた。この方法では、耐性型のeEF2の発現のみに取り込みが依存するため、実際のラベルの取り込み量は低く、また野生型eEF2を発現させた場合を対照としても、その値に大きな差が認められなかった。現在トランスフェクション効率を100%にするため、レンチウィルスベクターを用いることにした。このコンストラクトは現在作製中である。またDT耐性型EF-2のH715M型変異は、ジフテリア毒素の標的アミノ酸であるジフタマイド形成ができない変異を起こしているため、eEF2活性が野生型と変わらなければ、この変異は有用と考えられる。現在この変異型eEF2を作成中である。(2)実際にDT投与によりマウス肝臓にダメージを与え、DT耐性型ヒト肝細胞を移植した場合にどの程度の細胞が移植を受け、時間経過に従いどの程度増殖していくかを、非侵襲的かつ経時的に追跡できる方法の開発は重要である。そこでアクチンプロモーター下にLuciferaseを発現するTgマウスを作製し、この肝細胞を移植しIVIS(in vivo imaging system)を用いて肝細胞生着の様子を観察できるか否か検討した。TRECK-Tg肝炎モデルマウスにDTを腹腔投与し部分的にダメージを与え、Lucを発現している肝細胞を経脾的に移植した。4日目以降から肝臓に移植した細胞を検出することができ、2週、3週と経時的に増加していく像が観察された。今後は発光量と移植細胞数との間の相関を明らかにし、定量的な実験結果を出すことを目指す必要がある。

（1）去年，将EEF2（G717R）cDNA转染到人来源的培养细胞中，并通过掺入标记的氨基酸来检查对白喉毒素（DT）的耐药性。在这种方法中，由于摄取仅取决于抗性EEF2的表达，因此实际的标签摄取量很低，并且在野生型EEF2的值中没有观察到的显着差异作为对照。目前，已选择慢病毒载体用于达到100％的转染效率。该结构目前正在建设中。此外，抗DT的EF-2的H715M型突变会导致无法形成二乙酰胺的突变，即白喉毒素的靶氨基酸，因此，只要EEF2活性与野生类型没有什么不同，该突变就被认为是有用的。目前正在生产此突变EEF2。 （2）开发一种可以跟踪细胞量的方法很重要，该方法实际上会通过施用DT损害小鼠肝脏，并将其移植多少以及它们会随着时间的推移而生长的数量，而DT抗DT抗DT的人肝细胞是移植的。因此，在肌动蛋白启动子下制备表达荧光素酶的TG小鼠，并将这些肝细胞移植并检查它们是否可以使用体内成像系统（IVIS）观察肝细胞植入的状态。将DT腹膜内腹膜腹膜内施用，以造成部分损伤，并对表达Luc的肝细胞进行了转移植入。从第四天开始，检测到移植到肝脏的细胞，并且随着时间的推移从2周增加到3周。将来，有必要阐明发光量与移植细胞数量之间的相关性，并产生定量的实验结果。

项目成果

Targeted ablation of osteocytes causes osteoporosis with defective mechanotranduction.

骨细胞的靶向消融会导致机械传导缺陷的骨质疏松症。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Cell Metabolism 5
• 作者: Takada;T.;T. Ishii;T. Machimoto;Y. Kimura;S. Tatsumi
• 通讯作者: S. Tatsumi

Protective role of alveolar macrophages in non-inflammatory lung injury caused by selective ablation of alveolar epithelial type II cells.

肺泡巨噬细胞在选择性消融 II 型肺泡上皮细胞引起的非炎症性肺损伤中的保护作用。

• 发表时间: 2007
• 期刊: J. Immunol. 178
• 作者: Takada;T.;T. Ishii;T. Machimoto;Y. Kimura;S. Tatsumi;Y. Miyake
• 通讯作者: Y. Miyake

IVISを用いた肝細胞移植の可視化

使用 IVIS 实现肝细胞移植的可视化

• 发表时间: 2007
• 作者: Takada;T.;T. Ishii;T. Machimoto;Y. Kimura;S. Tatsumi;Y. Miyake;河野 憲二;河野憲二;斉藤 美知子;新井布美子;松岡邦枝;古川賀絵
• 通讯作者: 古川賀絵

標的細胞ノックアウト(TRECK)法による誘導型好酸球欠損マウスの樹立とアレルギー反応の解析

靶向细胞敲除（TRECK）法诱导嗜酸性粒细胞缺陷小鼠的建立及过敏反应分析

• 发表时间: 2007
• 作者: Takada;T.;T. Ishii;T. Machimoto;Y. Kimura;S. Tatsumi;Y. Miyake;河野 憲二;河野憲二;斉藤 美知子;新井布美子;松岡邦枝
• 通讯作者: 松岡邦枝

蛋白質 核酸 酵素 4月号「ジフテリア毒素受容体を利用した疾患モデルマウスの作製」

蛋白核酸酶4月号《利用白喉毒素受体建立疾病模型小鼠》

• 发表时间: 2009
• 作者: Takada;T.;T. Ishii;T. Machimoto;Y. Kimura;S. Tatsumi;Y. Miyake;河野 憲二;河野憲二;斉藤 美知子;新井布美子;松岡邦枝;古川賀絵;河野憲二;河野憲二;河野憲二;石井隆道;斉藤 美知子
• 通讯作者: 斉藤 美知子