TRECK肝炎モデルマウスを用いたヒト肝機能をもつマウスの作製

使用 TRECK 肝炎模型小鼠产生具有人类肝功能的小鼠

• 批准号: 19650107
• 负责人: 河野 憲二
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Nara Institute of Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19650107/
• 关键词: 移植・再生医療; 応用動物; 細胞・組織; ジフテリア毒素

(1)昨年度に引き続き、eEF2(G717R)cDNAをヒト由来培養細胞にトランスフェクトし、ジフテリア毒素(DT)に対する耐性度を標識アミノ酸の取り込みにより調べた。この方法では、耐性型のeEF2の発現のみに取り込みが依存するため、実際のラベルの取り込み量は低く、また野生型eEF2を発現させた場合を対照としても、その値に大きな差が認められなかった。現在トランスフェクション効率を100%にするため、レンチウィルスベクターを用いることにした。このコンストラクトは現在作製中である。またDT耐性型EF-2のH715M型変異は、ジフテリア毒素の標的アミノ酸であるジフタマイド形成ができない変異を起こしているため、eEF2活性が野生型と変わらなければ、この変異は有用と考えられる。現在この変異型eEF2を作成中である。(2)実際にDT投与によりマウス肝臓にダメージを与え、DT耐性型ヒト肝細胞を移植した場合にどの程度の細胞が移植を受け、時間経過に従いどの程度増殖していくかを、非侵襲的かつ経時的に追跡できる方法の開発は重要である。そこでアクチンプロモーター下にLuciferaseを発現するTgマウスを作製し、この肝細胞を移植しIVIS(in vivo imaging system)を用いて肝細胞生着の様子を観察できるか否か検討した。TRECK-Tg肝炎モデルマウスにDTを腹腔投与し部分的にダメージを与え、Lucを発現している肝細胞を経脾的に移植した。4日目以降から肝臓に移植した細胞を検出することができ、2週、3週と経時的に増加していく像が観察された。今後は発光量と移植細胞数との間の相関を明らかにし、定量的な実験結果を出すことを目指す必要がある。

(1) annual に yesterday led き 続 き, eEF2 (G717R) cDNA を ヒ ト origin culture cell に ト ラ ン ス フ ェ ク ト し, ジ フ テ リ ア toxin (DT) に す seaborne る degree of patience を logo ア ミ ノ acid の take り 込 み に よ り adjustable べ た. こ の way で は type, patience の eEF2 の 発 is の み に take り 込 み が dependent す る た め, be interstate の ラ ベ ル の take り 込 み は low く, ま た wild-type eEF2 を 発 now さ せ を た occasions as seaborne と し て も, そ の numerical に big き な poor が recognize め ら れ な か っ た. Now ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン unseen を 100% に す る た め, レ ン チ ウ ィ ル ス ベ ク タ ー を with い る こ と に し た. Youdaoplaceholder0 コ ストラ ストラ ト ト ト is currently in production である. ま た DT type patience EF - 2 の H715M - different は, ジ フ テ リ ア toxin の mark ア ミ ノ acid で あ る ジ フ タ マ イ ド form が で き な い - different を up こ し て い る た め, eEF2 activity が wild-type と - わ ら な け れ ば, こ の - different は useful と exam え ら れ る. Now the <s:1> <s:1> variant eEF2を is being made である. (2) the event be cast with に に DT よ り マ ウ ス routine liver に ダ メ ー ジ を and え, DT type patience ヒ を ト liver cells transplantation し た occasions に ど の degree が の cells transplantation を け, time 経 に 従 い ど の level raised colonization し て い く か を, noninvasive か つ 経 に when tracing で き る method の open 発 は important で あ る. そ こ で ア ク チ ン プ ロ モ ー タ ー under に Luciferase を 発 now す る Tg マ ウ ス を as し, こ を の liver cells transplantation し IVIS (in vivo imaging system) を with い て liver cells with の others child を 観 examine で き る か no か beg し 検 た. Tg - TRECK - hepatitis モ デ ル マ ウ ス に DT を abdominal cast with the に し ダ メ ー ジ を and え, Luc を 発 now し て い る hepatocellular を 経 に of spleen transplantation し た. 4 orders to drop か ら perforatien に liver transplantation し た cells を 検 out す る こ と が で き, 2 weeks, 3 weeks と 経 に raised when add し て い く like が 観 examine さ れ た. The future は 発 light と transplanted cells number と の の phase between masato を Ming ら か に し, quantitative な be 験 results を out す こ と を refers す necessary が あ る.

项目成果

Targeted ablation of osteocytes causes osteoporosis with defective mechanotranduction.

骨细胞的靶向消融会导致机械传导缺陷的骨质疏松症。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Cell Metabolism 5
• 作者: Takada;T.;T. Ishii;T. Machimoto;Y. Kimura;S. Tatsumi
• 通讯作者: S. Tatsumi

Protective role of alveolar macrophages in non-inflammatory lung injury caused by selective ablation of alveolar epithelial type II cells.

肺泡巨噬细胞在选择性消融 II 型肺泡上皮细胞引起的非炎症性肺损伤中的保护作用。

• 发表时间: 2007
• 期刊: J. Immunol. 178
• 作者: Takada;T.;T. Ishii;T. Machimoto;Y. Kimura;S. Tatsumi;Y. Miyake
• 通讯作者: Y. Miyake

IVISを用いた肝細胞移植の可視化

使用 IVIS 实现肝细胞移植的可视化

• 发表时间: 2007
• 作者: Takada;T.;T. Ishii;T. Machimoto;Y. Kimura;S. Tatsumi;Y. Miyake;河野 憲二;河野憲二;斉藤 美知子;新井布美子;松岡邦枝;古川賀絵
• 通讯作者: 古川賀絵

医学のための細胞生物学

医学细胞生物学

• 发表时间: 2009
• 作者: 永田和宏;塩田浩平(編)
• 通讯作者: 塩田浩平(編)

TRECK-Tg疾患モデルマウスの作成と再生医学への応用

TRECK-Tg疾病模型小鼠的建立及其在再生医学中的应用

• 发表时间: 2008
• 作者: Takada;T.;T. Ishii;T. Machimoto;Y. Kimura;S. Tatsumi;Y. Miyake;河野 憲二;河野憲二
• 通讯作者: 河野憲二