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哺乳動物小胞体ストレス応答の分子機構の解明

阐明哺乳动物内质网应激反应的分子机制

基本信息

批准号：
24248019
负责人：
河野憲二
金额：
$ 12.23万
依托单位：
Nara Institute of Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1小胞体膜上での特殊スプライシング機構の解析XBPluタンパク質の小胞体膜アンカーに必要なHR2領域に結合してくるタンパク質の単離と解析を試みた。XBPluタンパク質は生細胞内では安定ではなく、またあまり作られないタンパク質なので、その中でも合成量の多い3HA-XBPlu(L246A)mNLS(一時停止をせず、且つ核移行をしない変異型XBPIu)を用いて免疫共沈降してくる結合タンパク質の解析を行った。3HA-XBPlu(L246A)mNLSに結合してくる特異的なバンドを検出するのは難しかったが、このサンプルをすべて質量分析(LC/MS/MS)し、特徴的な結合タンパク質88個を検出した。しかしこのままでは解析するには数が多すぎるので、非特異的バンドを抑える工夫をしている。2寄生虫排除に関与するIRE1βの生理機能解析寄生虫感染時に分泌されるIL33投与により疑似感染状態を再現できることがわかったので、IL33投与による小腸杯細胞の形態変化に着目し野生型マウスとIRE1βKOマウスとで比較を行った。野生型マウスでは杯細胞の数と大きさが増加し、ムチン産生が高まるが、IREIβKOマウスでは変化は殆ど観察されなかった。小腸組織を電子顕微鏡観察したところ、KOマウスでは杯細胞の小胞体肥大化が観察され、ムチン産生に異常が生じていることが示唆された。今後はムチン産生に関し生化学的解析を加え、ムチン産生量、前駆体ムチンの小胞体内での凝集などを明らかにしたいと考えている。

1. Analysis of the special structure of the cell membrane XBPlu structure XBPlu (L246A)mNLS(Temporary Stop, Nuclear Transition, Heterotypic XBPIu) is used to analyze the binding of XBPlu to the protein. 3HA-XBPlu(L246A)mNLS binding to specific binding sites was detected by LC/MS/MS, and 88 binding sites were detected by characteristic binding sites. The number of unexplained, non-specific unexplained cases is limited. 2. Analysis of physiological function of IRE 1β in parasite elimination and IL33 secretion during parasite infection and reproduction of suspected infection status. The number of wild-type cells increased, and the number of cells produced increased. IREIβKO cells increased. Microscopic examination of the small intestine revealed that there was an abnormality in the development of small cell hypertrophy. In the future, the biochemical analysis of the production of protein, the amount of protein produced, the aggregation of protein in cells and the formation of protein in cells will be increased.