クロマチンリモデリングに関与するヘリカーゼによる転写調節ネットワーク

参与染色质重塑的解旋酶的转录调控网络

• 批准号: 13206050
• 负责人: 河野 憲二
• 金额: $ 2.56万
• 依托单位: Nara Institute of Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13206050/
• 关键词: RuvBタンパク質; クロマチンリモデリング; ヘリカーゼ; 転写調節; マイクロアレイ; TBP

RVB2/TIH2の高温感受性株を利用し、また酵母DNAマイクロアレイ法を用いることにより、RVB2/TIH2依存的に転写調節を受ける遺伝子群を網羅的に探索した。マイクロアレイを行った結果、Rvb2p/Tih2pが不活化すると転写が抑制されるもの、逆に転写が促進される遺伝子群があり、転写が抑制されるものの多くはΔino80でも転写が抑制されていた。一方転写が促進される遺伝子群はΔino80とは挙動を共にしなかった。これらの結果をノザン解析を行うことにより確認した。この結果から、RVB複合体はIno80複合体に含まれ転写を制御している場合と、Ino80とは別の形で転写を制御している場合とがあることが予想された。免疫共沈降実験により、Rvb2p/Tih2pとRvb1p/Tih1pとは複合体を形成していることがわかったが、さらにGST-RVB融合タンパク質を作製し、GST pull-down実験を行うことにより、Rvb1pとRvb2pとが直接結合している可能性が高いことが明らかとなった。また、同様な免疫沈降実験によりRVB複合体とTBPとは相互作用していることが判明した。TBPとRVB2との2重変異株を作製すると、29℃での細胞の生育ができなくなる合成効果がみとめられ、両者が遺伝的にも関連していることが裏付けられた。面白いことに、この効果はTBPのアレルに特異的であり、その部位とRVB複合体とが相互作用している可能性がでてきた。現在、RVB複合体に含まれる個々のタンパク質を、MALDI-TOFを用いて解析しており、新しいタンパク質が同定されつつある。今後は、これらのタンパク質が転写制御にどのような役割を持つかを調べるとともに、標的遺伝子が明らかになったので、その転写制御に実際にRVB1/TIH1,RVB2/TIH2が関わっているのかどうかを種々の方法で確認していきたい。

RVB2/TIH2 thermophilic strain is used to explore the subgroup of the Internet by using yeast DNA strain, yeast yeast, and the RVB2/TIH2-dependent strain, which is written by the Internet. The results show that Rvb2p/Tih2p does not activate write suppression, reverse write promotion, write suppression, write suppression, and write suppression. On the one hand, we write to promote the promotion of the sub-group Δ ino80 activities. We are in total contact with each other. The results show that the parsing line does not confirm that the line is correct. The results show that the RVB complex, the Ino80 complex, contains the information that you want to write, and that you want to use, and that you want to, and that the Ino80 is not. Immunoprecipitation, Rvb2p/ Tih2pcDNA Rvb1p

项目成果

Y.Fujioka, Y.Kimata, K.Nomaguchi, K.Watanabe, K.Kohno: "Identification of a novel non-SMC component of the SMC5/SMC6 complex involved in DNA repair"Journal of Biological Chemistry. 277(In press). (2002)

Y.Fujioka、Y.Kimata、K.Nomaguchi、K.Watanabe、K.Kohno：“鉴定参与 DNA 修复的 SMC5/SMC6 复合物的新型非 SMC 成分”生物化学杂志。