親水性ポリスチレン高親和性ペプチドを用いた革新的蛋白質相互作用解析システムの創製

使用亲水性聚苯乙烯高亲和力肽创建创新的蛋白质相互作用分析系统

• 批准号: 19656221
• 负责人: 中西 一弘
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19656221/
• 关键词: タンパク質; 相互作用; オウロテオーム; クッションタンパク質; ポリスチレン; 親和性ペプチド; ストレプトアビジン; システイン合成酵素; 親水性ポリスチレン; O-acetylserine sulfhydrylase-A; Serine acetyltrasferase; Core streptavidin; ELISA; タンパク質-タンパク質相互作用

本年度は、親水性ポリスチレン親和性ペプチドを用いた、1)コアストレプトアビジン(Core-SA)-DNA相互作用解析と2)相互作用に関与する機能性ペプチド部位を連結したクッションタンパク質を用いた相互作用解析を計画したが、両課題共に、初期の予定を達成できた。1)の課題においては、4量体のCore-SAに連結する親和性ペプチド(PSペプチド)の個数を変えて、その固定化特性とオリゴDNAとの相互作用をELISA法で検出した。結果として、4つのPSペプチドを連結したCore-SAは共存する高濃度牛血清アルブミンとの競合に影響されることなく、最も強固に固定化できることを示した。さらに、ビオチン標識オリゴDNAを連結したペプチドタグ連結コアストレプトアビジンは、市販のSA-coated plateよりも高い検出感度を示すことがわかった。一方、2)の課題に関しては,システイン合成酵素を構成するO-acetylserine sulfhydryrase-A(OASS-A)とそのC末端で相互作用することが知られているserine acetyltransferase(SAT)との間の相互作用に着目した。SATのC末端20残基からなるオリゴペプチドを、そのN末端にPSペプチドを連結したクッションタンパク質(RNaseHII)のC末端に連結し、オリゴペプチドのC末端アミノ酸を変化させてOASS-Aとの相互作用をELISA法で検出した結果、C末端アミノ酸がイソロイシンの野生型ペプチドを提示させた場合にのみ、相互作用することがわかった。同様に、Strep-tagIIをクッションタンパク質に提示したが、そのN末端をクッションタンパク質に向けて結合した場合にのみstreo-tactinと強い相互作用を示した。これらの結果から、本研究で検討した、親水性PS特異的親和性ペプチを用いる相互作用解析方法は、極めて高い検出感度と特異性を有することが明らかにされた。

This year, the hydrophilic group affinity selection was used, 1) the interaction analysis of the Core-SA-DNA interaction, 2) the interaction analysis of the functional group site related to the interaction, 3) the interaction analysis of the Core-SA-DNA interaction, and 4) the preliminary determination of the project. 1) The number, immobilization characteristics and DNA interaction of 4 quantities of Core-SA linkage were detected by ELISA. The results showed that the PS protein was strongly immobilized by Core-SA, and the protein was strongly immobilized by Core-SA. In addition, the SA-coated plate has a high sensitivity to detection. The interaction between O-acetylserine sulfhydrase-A (OASS-A) and the C-terminal end of serine acetyltransferase (SAT) was investigated. The C-terminal 20 residues of SAT are linked to the N-terminal PS, and the C-terminal residues of RNase HII are linked to the N-terminal PS. The C-terminal residues of SAT are linked to the N-terminal PS, and the C-terminal residues of RNase HII are linked to the N-terminal PS. The interaction of OASS-A is detected by ELISA. The results show that the C-terminal residues of SAT are linked to the N-terminal PS. Strep-tagII is a strong interaction between strep-actin and N-terminal strep-actin. The results of this study were discussed in detail. The affinity of hydrophilic PS was determined by the interaction analysis method. The sensitivity of PS was determined by the specificity of PS.

项目成果

クッションタンパク質を用いたバイオ分子固定化技術

使用缓冲蛋白的生物分子固定化技术

• 发表时间: 2008
• 作者: 熊田陽一;中西一弘;Kazuhiro Nakanishi;Hiroyuki Imanaka;Hiroyuki Imanaka;熊田 陽一;今中 洋行;今中 洋行
• 通讯作者: 今中 洋行

Construction of TexStyle {{\it Escherichia coli}} TexStyle cell surface display system by autotransporter

利用自动转运蛋白构建TexStyle {{it 大肠杆菌}} TexStyle 细胞表面展示系统

• 发表时间: 2008
• 作者: 熊田陽一;中西一弘;Kazuhiro Nakanishi;Hiroyuki Imanaka;Hiroyuki Imanaka
• 通讯作者: Hiroyuki Imanaka

ポリスチレン親和性ペプチド標識タンパク質を用いる迅速免疫測定

使用聚苯乙烯亲和肽标记蛋白进行快速免疫分析

• 发表时间: 2007
• 作者: 海老沼拓史;中須賀真一;水本博 他;H. YOSHINO;K.Hashimoto;中西 一弘
• 通讯作者: 中西 一弘

Adsorption Characteristics of Various Proteins to a Titanium Surface

• DOI: 10.1263/jbb.106.273
• 发表时间: 2008-09-01
• 期刊: JOURNAL OF BIOSCIENCE AND BIOENGINEERING
• 影响因子: 2.8
• 作者: Imamura, Koreyoshi;Shimomura, Miyuki;Nakanishi, Kazuhiro
• 通讯作者: Nakanishi, Kazuhiro

ヒト由来転写因子とDNAとの相互作用解析システムの検討

人源转录因子与DNA相互作用分析系统的检验

• 发表时间: 2008
• 作者: 熊田陽一;中西一弘;Kazuhiro Nakanishi;Hiroyuki Imanaka;Hiroyuki Imanaka;熊田 陽一;今中 洋行
• 通讯作者: 今中 洋行