固体表面に対する親和性と配向の精密制御されたタンパク質の創製

创建具有精确控制的亲和力和对固体表面的方向的蛋白质

• 批准号: 11132250
• 负责人: 中西 一弘
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11132250/
• 关键词: 付着; ペプチド; ラテックス; 吸着等温線; RNaseA; 不可逆吸着; ステンレス

本研究では、タンパク質と固体表面の直接の相互作用に着目して、固体表面に対する親和性と配向の制御されたタンパク質の創製を最終目的として、1)固体表面に直接相互作用するタンパク質分子内ペプチド部位を特定する方法の確立と、2)ペプチド部位の固体表面に対する親和性の強さとそのアミノ酸組成・長さ・二次構造等との関係を明らかにすることである。本年度はモデルタンパク質として、主として分子量が小さく三次元構造が明らかにされている、ウシ膵臓由来リボヌクレアーゼA(RNaseA)を、固体表面としてステンレス粒子とポリスチレンラテックス(Pslatex)を用いて、固体表面に直接相互作用する部位の同定と相互作用に関する知見を得ることを目的とした。RNaseAをカルボキシメチル化した後、トリプシン処理し、得られたペプチド混合液あるいは合成したペプチドを試験液に溶解し、吸着等温線を測定した。主な成果は次の3点に要約される。1)RNaseAの各pHにおけるステンレスに対する吸着等温線はいずれもLangmuir型を示したが、高pH領域では、殆ど吸着がみられなかった。Pslatexの場合では吸着等温線はpHに殆ど依存せず、不可逆吸着を示した。2)トリプシン処理によって得られたRNaseA由来ペプチドを用いて吸着実験を行ったところ、ステンレスに対しては酸性アミノ酸残基を含むペプチド10が、Pslatexに対しては、疎水性アミノ酸残基を多く含むペプチド9が顕著に吸着していた。3)ペプチド9-1の疎水性アミノ酸残基であるIleをGlyに、ペプチド9-3のPheをGlyに、10-1の酸性アミノ酸残基GluとAspをGlyに置換したペプチドを合成し、吸着特性の変化を調べたところ、いずれのペプチドも吸着力は激減した。これらの結果から、ステンレスに対する吸着には酸性アミノ酸残基が、Pslatexに対する吸着には、疎水性アミノ酸残基による疎水相互作用とベンゼン環同士のπ-π相互作用が深く関与していることが示唆された。

The purpose of this study is to establish a method for direct interaction between molecules and solid surfaces, affinity and alignment control of solid surfaces, and the ultimate goal of creating molecules. 2) The relationship between the affinity of the solid surface and the acid composition, length and secondary structure is clear. This year, the three dimensional structure of the solid surface, the main molecular weight and the main molecular weight of the solid surface have been changed, and the origin of the solid particle has been changed. Rnase A is a mixture of organic and inorganic compounds. The main result is a 3-point offer. 1) The adsorption isotherm of RNase A at various pH values is Langmuir type, and the adsorption isotherm at high pH values is Langmuir type. In the case of Pslatex, the sorption isotherm is pH dependent and irreversible sorption is indicated. 2) RNaseA is derived from the acid residue and contains the acid residue. Pslatex is derived from the acid residue. 3) Select the 9-1 amino acid residue, Ile to Gly, Phe to Gly, 10-1 amino acid residue, Glu to Gly, Asp to Gly, Gly to Gly to The results are as follows: Sorption of acid residues, Pslatex of water residues, π-π interaction of ring molecules.

项目成果

Takaharu SAKIYAMA: "Adsorption Characteristics of Tryptic Fragments of Bovine β-Lactoglobulin on a Stainless Steel Surface"Journal of Bioscience and Bioengineering. 88. 536-541 (1999)

Takaharu SAKIYAMA：“不锈钢表面上牛 β-乳球蛋白胰蛋白酶片段的吸附特性”《生物科学与生物工程杂志》88. 536-541 (1999)。