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細胞周期と初期発生に関わる分子群の新規解析法の開発

細胞周期と初期発生に関わる分子群の新規解析法の開発
开发细胞周期和早期发育相关分子的新分析方法
批准号：
19657055
负责人：
中山 啓子
金额：
$2.24万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
2007 至 2008
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19657055/
关键词：
細胞増殖分化細胞内小器官蛍光ラベルレンチウィルスGemininhistoneH3.1蛍光タンパク質ノックアウトマウスセントリンII

项目摘要

项目成果

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核膜を標識するためにラミンBを、中心体の標識にセントリン2を、細胞膜の標識にβ-カテニン、E-カドヘリンを用いた積まず、これらのタンパク質のcDNAをRT-PCRにて取得し、そのcDNAの5'側または3'側に蛍光色素をコードするcDNAをin frameで連結し、標識タンパク質と蛍光色素の融合タンパク質をコードするcDNAを作製した。融合タンパク質のcDNAを発現ベクターにクローニングし、腫瘍細胞へ発現し、蛍光顕微鏡にて観察し、融合タンパク質が、予想された目的とする細胞内局在をとることを確認した。このベクターを鋳型にRNA polymeraseを用いて転写反応を行い、RNAを作製した。さらにpoly Aを付加した後、精製し、注入用RNAとした。このRNAをマウス一細胞期胚に注入した。RNA注入後、48時間後に蛍光顕微鏡で観察し、期待される細胞内局在をとっているか、胚の発生は正常に進行しているかを判定した。さらにこの胚を固定し、各小器官に特有のタンパク質に対する抗体で、免疫染色を行い、発現させた融合タンパク質と共局在することを確認した。その結果、ラミンBおよびE-カドヘリンは、有用なツールであることが判明したが、中心体を標識するセントリン2は、発現が弱く明瞭な染色が得られなかった。ラミンBおよびE-カドヘリンは、さらに継時的に観察をタイムラプス蛍光顕微鏡で行った。RNA注入12時間後より、30分ごとに96時間までの観察を行い。この間の蛍光強度の変化を調べたところ、いずれも96時間の間に蛍光強度は減衰するものの、観察は可能であることが判明した。
期刊论文(28)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
Skp2 controls adipocyte proliferation during the development of obesity
DOI： 10.1074/jbc.m608144200
发表时间： 2007-01-19
期刊： JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
影响因子： 4.8
作者： [Sakai, Tamon, Sakaue, Hiroshi, Kasuga, Masato]
通讯作者： Kasuga, Masato
The cyclin-dependent kinase inhibitors p57 and p27 regulate neuronal migration in the developing mouse neocortex
DOI： 10.1074/jbc.m609944200
发表时间： 2007-01-05
期刊： JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
影响因子： 4.8
作者： [Itoh, Yasuhiro, Masuyama, Norihisa, Gotoh, Yukiko]
通讯作者： Gotoh, Yukiko
Targeting the p27 E3 ligase SCFSkp2 results in p27-and Skp2-mediated cell-cycle arrest and activation of autophagy
DOI： 10.1182/blood-2007-09-112904
发表时间： 2008-05-01
期刊： BLOOD
影响因子： 20.3
作者： [Chen, Qing, Xie, Weilin, Orlowski, Robert Z.]
通讯作者： Orlowski, Robert Z.
ユビキチンリガーゼFbw7は表皮角化細胞において増殖と分化を制御する
泛素连接酶 Fbw7 控制表皮角质形成细胞的增殖和分化
DOI： --
发表时间： 2007
期刊：
影响因子： --
作者： [石川善則, et. al.]
通讯作者： et. al.
共 31 条
    腫瘍環境におけるFibulin 2の選択的スプライシングによる腫瘍進展制御機構の解明
    • 批准号：
      24K02300
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
    • 资助金额：
      $11.9万
    • 财政年份：
      2024
    • 负责人：
      中山 啓子
    • 依托单位：
      Tohoku University
    Function of SETD5 in pancreatic cancer
    • 批准号：
      21H02458
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
    • 资助金额：
      $11.15万
    • 财政年份：
      2021
    • 负责人：
      中山 啓子
    • 依托单位：
      Tohoku University
    RAS活性化による転写制御ー染色体領域に注目したアプローチによる解析
    • 批准号：
      23300346
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
    • 资助金额：
      $5.91万
    • 财政年份：
      2011
    • 负责人：
      中山 啓子
    • 依托单位：
      Tohoku University
    In vivoタンパク質複合体形成モニタリングの試み
    • 批准号：
      22657052
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
    • 资助金额：
      $2.19万
    • 财政年份：
      2010
    • 负责人：
      中山 啓子
    • 依托单位：
      Tohoku University
    国内基金
    海外基金
    中药活性成分土木香内酯靶向 TXNL2 通过caspase-3/GSDME 介导的细胞焦亡抗未分化甲状腺癌的机制研究
    • 批准号：
      ZCLQN26H2801
    • 项目类别：
      省市级项目
    • 资助金额：
      --
    • 批准年份：
      2026
    • 负责人：
      温庆良
    • 依托单位：
      浙江省肿瘤医院
    “调髓和瘿”法调控α9 nAChR表达促进Treg细胞分化治疗AIT的研究
    黄精多糖体外诱导人脐带间充质干细胞分化为神经样细胞的实验研究
    基于BMP2/Smad1/Runx2通路调控干细胞成骨分化及桃红四物汤促进骨折愈合的研究
    • 批准号：
      2026JJ80308
    • 项目类别：
      省市级项目
    • 资助金额：
      --
    • 批准年份：
      2026
    • 负责人：
      贺渊哲
    • 依托单位：
      常德市第一中医医院