細胞周期と初期発生に関わる分子群の新規解析法の開発

开发细胞周期和早期发育相关分子的新分析方法

• 批准号: 19657055
• 负责人: 中山 啓子
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19657055/
• 关键词: 細胞増殖; 分化; 細胞内小器官; 蛍光ラベル; レンチウィルス; Geminin; histoneH3.1; 蛍光タンパク質; ノックアウトマウス; セントリンII

核膜を標識するためにラミンBを、中心体の標識にセントリン2を、細胞膜の標識にβ-カテニン、E-カドヘリンを用いた積まず、これらのタンパク質のcDNAをRT-PCRにて取得し、そのcDNAの5'側または3'側に蛍光色素をコードするcDNAをin frameで連結し、標識タンパク質と蛍光色素の融合タンパク質をコードするcDNAを作製した。融合タンパク質のcDNAを発現ベクターにクローニングし、腫瘍細胞へ発現し、蛍光顕微鏡にて観察し、融合タンパク質が、予想された目的とする細胞内局在をとることを確認した。このベクターを鋳型にRNA polymeraseを用いて転写反応を行い、RNAを作製した。さらにpoly Aを付加した後、精製し、注入用RNAとした。このRNAをマウス一細胞期胚に注入した。RNA注入後、48時間後に蛍光顕微鏡で観察し、期待される細胞内局在をとっているか、胚の発生は正常に進行しているかを判定した。さらにこの胚を固定し、各小器官に特有のタンパク質に対する抗体で、免疫染色を行い、発現させた融合タンパク質と共局在することを確認した。その結果、ラミンBおよびE-カドヘリンは、有用なツールであることが判明したが、中心体を標識するセントリン2は、発現が弱く明瞭な染色が得られなかった。ラミンBおよびE-カドヘリンは、さらに継時的に観察をタイムラプス蛍光顕微鏡で行った。RNA注入12時間後より、30分ごとに96時間までの観察を行い。この間の蛍光強度の変化を調べたところ、いずれも96時間の間に蛍光強度は減衰するものの、観察は可能であることが判明した。

Nuclear membrane を logo す る た め に ラ ミ ン を B, centrosome の logo に セ ン ト リ ン の logo に beta 2 を, cell membrane カ テ ニ ン, E - カ ド ヘ リ ン を with い た product ま ず, こ れ ら の タ ン パ ク qualitative の cDNA を rt-pcr に て obtain し, そ の cDNA の 5 'side ま た は 3' side に 蛍 photopigment を コ ー ド す る cDNA を I N frame で link し, identifies タ ン パ ク qualitative と 蛍 photopigment の fusion タ ン パ ク qualitative を コ ー ド す る cDNA を cropping し た. Fusion タ ン パ ク qualitative の cDNA を 発 now ベ ク タ ー に ク ロ ー ニ ン グ し, swollen sores cell へ 発 し, 蛍 light 顕 micromirror に て 観 し, fusion タ ン パ ク が, to want to さ れ た purpose と す る cells inside bureau in を と る こ と を confirm し た. Type こ の ベ ク タ ー を where に RNA polymerase を with い て planning to write an 応 を い, RNA を cropping し た. Youdaoplaceholder0 poly Aを is added to <s:1> た, then refined <s:1> and injected RNAと と た た. <s:1> pectin RNAを ウス ウス a cell stage embryo に is injected into た た. RNA, 48 time after injection に 蛍 light 顕 micromirror で 観 し, expect さ れ る cells inside bureau in を と っ て い る か, embryo の 発 born on normal に は し て い る か を determine し た. さ ら に こ の embryo を fixed し, each small organ characteristic の に タ ン パ ク qualitative に す seaborne で る antibody, immune dyeing line を い, 発 now さ せ た fusion タ ン パ ク qualitative と total bureau in す る こ と を confirm し た. そ の results, ラ ミ ン B お よ び E - カ ド ヘ リ ン は, useful な ツ ー ル で あ る こ と が.at し た が, centrosome を logo す る セ ン ト リ ン 2 は, 発 が weak く now clear な dyeing が must ら れ な か っ た. ラ ミ ン B お よ び E - カ ド ヘ リ ン は, さ ら に 継 when に 観 examine を タ イ ム ラ プ ス 蛍 light 顕 micromirror で line っ た. 12 minutes after RNA injection, よ よ, 30 minutes ごとに, 96 minutes まで 観, を, を, を. Between こ の の 蛍 light intensity の variations change を adjustable べ た と こ ろ, い ず れ も 96 time between の に 蛍 light intensity は damping す る も の の and examines 観 は may で あ る こ と が.at し た.

项目成果

Skp2 controls adipocyte proliferation during the development of obesity

• DOI: 10.1074/jbc.m608144200
• 发表时间: 2007-01-19
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Sakai, Tamon;Sakaue, Hiroshi;Kasuga, Masato
• 通讯作者: Kasuga, Masato

The cyclin-dependent kinase inhibitors p57 and p27 regulate neuronal migration in the developing mouse neocortex

• DOI: 10.1074/jbc.m609944200
• 发表时间: 2007-01-05
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Itoh, Yasuhiro;Masuyama, Norihisa;Gotoh, Yukiko
• 通讯作者: Gotoh, Yukiko

Targeting the p27 E3 ligase SCFSkp2 results in p27-and Skp2-mediated cell-cycle arrest and activation of autophagy

• DOI: 10.1182/blood-2007-09-112904
• 发表时间: 2008-05-01
• 期刊: BLOOD
• 影响因子: 20.3
• 作者: Chen, Qing;Xie, Weilin;Orlowski, Robert Z.
• 通讯作者: Orlowski, Robert Z.

ユビキチンリガーゼFbw7は表皮角化細胞において増殖と分化を制御する

泛素连接酶 Fbw7 控制表皮角质形成细胞的增殖和分化

• 发表时间: 2007
• 作者: 石川善則;et. al.
• 通讯作者: et. al.

SCF型ユビキチンリガーゼによる細胞周期制御と発癌

SCF型泛素连接酶的细胞周期控制和致癌作用

• 发表时间: 2008
• 期刊: 実験医学(増刊) 26
• 作者: Tsukamoto;S.;中山敬一 and 中山啓子
• 通讯作者: 中山敬一 and 中山啓子