Gemininノックアウトマウスを用いた複製開始機構の解析

Geminin 基因敲除小鼠复制启动机制分析

• 批准号: 16026202
• 负责人: 中山 啓子
• 金额: $ 2.82万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16026202/
• 关键词: Geminin; ノックアウトマウス; 過剰複製; DNA合成; Mitosis; 前複製複合体; Cdt1; 細胞周期; 蛍光顕微鏡

GemininはDNA複製のライセンシング因子であるCdt1と結合し、Cdt1の前複製複合体(preRC)との結合を阻害する分子である。GemininがAPCによって分解されることによってCdt1は遊離しpreRCと結合することによって複製が再開すると考えられている。われわれはgemininノックアウトマウスを作製し胎生3.5日胚ですでに異常な形態をしめしていることを昨年までの研究で示してきた。そこで本年は、胎生3.5日胚の観察を継続すると同時に、コンディショナルノックアウトマウスの作製に着手した。Gemininノックアウトマウス3.5日胚は、細胞および核の大きさが不同であり、また一つの細胞に複数個の核が観察された。さらにBrdUラベルによるDNA合成期の核を染色すると大小不同に核がいずれも染まり、また一つの細胞内でも複数個の核が複製していることが判明した。一方、抗リン酸化ヒストンH3抗体によるM期細胞の染色では、野生型には複数個の細胞が染まるもののgemininノックアウト胚では染色が見られなかった。さらに受精後1.5日目に2細胞期胚を卵管より採取、培養を行った。するとgemininノックアウト胚は、4細胞期胚までは野生型と同様に増殖を継続するものの8細胞期で増殖を停止し、いったん観察される細胞間接着も低下することが判明した。このとき、抗geminin抗体で免疫染色を行うと、2細胞期胚では核内にgemininは染色されるが、ノックアウト胚では、4細胞期よりその染色性が低下し、8細胞期では認められなくなることが判明した。このことから、おそらくは母性由来のgemininが4細胞期までの細胞増殖を支持しているが、それがこの時期に消失すると同時に、過剰なS期の進行と共にM期の進行が阻害が生じていると考えられる。

Geminin は DNA replication の ラ イ セ ン シ ン グ factor で あ る Cdt1 と し, Cdt1 の before replication complex (preRC) と の combining を resistance against す る molecular で あ る. Geminin が APC に よ っ て decomposition さ れ る こ と に よ っ て Cdt1 は free し preRC と combining す る こ と に よ っ て copy open another す が る と exam え ら れ て い る. わ れ わ れ は geminin ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス を cropping し viviparous 3.5 day embryo で す で に abnormal な form を し め し て い る こ と を yesterday in ま で で の research in し て き た. そ こ で は, viviparous 3.5 this year, embryo の 観 examine を 継 続 す る と に, at the same time コ ン デ ィ シ ョ ナ ル ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス の cropping に to し た. Geminin ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス embryo は 3.5 days, cell お よ び nuclear の big き さ が different で あ り, ま た a つ の cell に plural の nuclear が 観 examine さ れ た. さ ら に BrdU ラ ベ ル に よ る DNA synthesis period の nuclear を dyeing す る と に nuclear size が い ず れ も dye ま り, ま た a つ の intracellular で も plural の nuclear が copy し て い る こ と が.at し た. Side, resisting リ ン acidification ヒ ス ト ン H3 antibody に よ る M phase cells の dyeing で は, wild type に は plural の cells が ま る も の の geminin ノ ッ ク ア ウ ト embryo で は dyeing が see ら れ な か っ た. On 1.5 days after さらに fertilization, the embryo at the に 2-cell stage を ootubules よ を are taken and cultured in を rows った. す る と geminin ノ ッ ク ア ウ ト embryo は, 4 cell stage embryos ま で は wild-type と with others に raised colonization を 継 続 す る も の の を stop し, 8 cell stage で raised colonization い っ た ん 観 examine さ れ る cells indirectly with low も す る こ と が.at し た. こ の と き line, resisting で geminin antibody immune dyeing を う と, 2 cell stage embryos で は intranuclear に geminin は dyeing さ れ る が, ノ ッ ク ア ウ ト embryo で は phase, 4 cell よ り そ の dyeing が し, 8 cell stage で は recognize め ら れ な く な る こ と が.at し た. こ の こ と か ら, お そ ら く は maternal origin の geminin が phase 4 cells ま で の cells raised colonization を support し て い る が, そ れ が こ の period に disappear す る と に at the same time, a turning stage な S の for と に M total の born to が resistance against が じ て い る と exam え ら れ る.

项目成果

Bcl-2-related protein A1 is an endogenous and cytokine-stimulated mediator of cytoprotection in hyperoxic acute lung injury

• DOI: 10.1172/jci200523004
• 发表时间: 2005-04-01
• 期刊: JOURNAL OF CLINICAL INVESTIGATION
• 影响因子: 15.9
• 作者: He, CH;Waxman, AB;Elias, JA
• 通讯作者: Elias, JA

Suppression of centrosome amplification after DNA damage depends on p27 accumulation

• DOI: 10.1158/0008-5472.can-05-3250
• 发表时间: 2006-04-15
• 期刊: CANCER RESEARCH
• 影响因子: 11.2
• 作者: Sugihara, E;Kanai, M;Miwa, M
• 通讯作者: Miwa, M

Mouse Fbw7/Sel-10/Cdc4 is required for Notch degradation during vascular development

• DOI: 10.1074/jbc.m312337200
• 发表时间: 2004-03-05
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Tsunematsu, R;Nakayama, K;Nakayama, KI
• 通讯作者: Nakayama, KI

HSP27 favors ubiquitination and proteasomal degradation of p27Kip1 and helps S-phase re-entry in stressed cells

• DOI: 10.1096/fj.05-4184fje
• 发表时间: 2006-06-01
• 期刊: FASEB JOURNAL
• 影响因子: 4.8
• 作者: Parcellier, Arnaud;Brunet, Mathilde;Garrido, Carmen
• 通讯作者: Garrido, Carmen

Distinct roles of c-Abl and Atm in oxidative stress response are mediated by protein kinase C delta.

c-Abl 和 Atm 在氧化应激反应中的独特作用由蛋白激酶 C δ 介导。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Genes Dev. 18
• 作者: Li;B.et al.
• 通讯作者: B.et al.