がん細胞選択的発現ベクターによる、ケモカイン遺伝子治療法の基礎的検討

使用癌细胞选择性表达载体进行趋化因子基因治疗的基础研究

• 批准号: 14030030
• 负责人: 向田 直史
• 金额: $ 3.78万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14030030/
• 关键词: 単球走化因子; アデノウイルスベクター; ケモカイン; フラクタルカイン; キメラ蛋白; マクロファージ; チミディン・キナーゼ; ガンシクロビール

従来の研究成果から、単球走化因子(MCP-1)遺伝子導入したがん細胞株の腫瘍形成能・転移能が低下することが明らかになっている。本年度は、MCP-1による遺伝子治療法の基礎的検討のために、(1)腫瘍免疫成立過程でのMCP-1の役割(2)自殺遺伝子併用によるMCP-1遺伝子治療法によるがん退縮効果の機序を検討した。その結果、(1)IL-4遺伝子導入colon 26細胞の腫瘍拒絶過程において、IL-4遺伝子導入株を接種したマウスの所属リンパ節では、MCP-1の発現が誘導される結果、抗原提示能を有するMCP-1レセプターを保有する樹状細胞が所属リンパ節へと動員され、腫瘍が効果的に拒絶されることを示唆する結果を得られた。(2)CAGプロモーター下流にチミディン・キナーゼ(tk)遺伝子とMCP-1遺伝子とを、IRES配列をはさんだ形で並列して連結させたアデノウイルスベクターを作成した。tkを単独で発現させるアデノウイルスベクターに比べて、今回作成したベクターによるtkの発現量は同程度であった。しかし、MCP-1産生量は、MCP-1遺伝子単独発現ベクターに比較して、今回作成したベクターは約1/10程度であった。しかし、ヒト肝がん細胞株を接種したヌードマウスの腫瘍内に、このベクターを接種して、ガンシクロビールを全身投与すると、腫瘍壊死因子の産生を伴い、マクロファージ依存性に、腫瘍が完全に退縮することが認められた。したがって、MCP-1を用いた遺伝子治療法の場合には、発現されるMCP-1量が低くても、標的細胞の動員・活性化を引き起こすことができる可能性があると考えられた。さらに、細胞膜に発現するMCP-1キメラ蛋白を発現するアデノウイルスベクターを開発し、このベクターの投与によって、細胞膜に生物活性を保有するMCP-1が発現していることを確認した。

従 research achievements to の か ら, 単 ball go factor (MCP - 1) posthumous son 伝 import し た が ん cell lines の swollen sores can form, planning to move to low が す る こ と が Ming ら か に な っ て い る. は this year, the MCP - 1 に よ る heritage 伝 の based 検 child therapy for の た め に, (1) established swollen sores immune process で の MCP - 1 (2) cut suicide but 伝 の service child with に よ る MCP - 1 heritage 伝 child therapy に よ る が ん back sharper fruit の machine sequence を beg し 検 た. Youdaoplaceholder0 そ results, (1)IL-4 progeny 伝 is introduced into colon 26 cells の swollen sores refused に お い て, IL - 4 but 伝 import strains を vaccination し た マ ウ ス の belongs リ ン パ section で は, MCP - 1 の 発 now が induced さ れ る results, antigen can prompt を す る MCP - 1 レ セ プ タ ー を retain す る dendritic cells が belongs リ ン パ section へ と mobilization さ れ, swollen sores が unseen fruit に refused さ れ る こ と を in business Youdaoplaceholder0 results を is られた. (2) the CAG プ ロ モ ー タ ー obscene に チ ミ デ ィ ン · キ ナ ー ゼ (tk) heritage 伝 child survived 伝 と MCP - 1 と を, IRES match column を は さ ん だ shape tied for し で て link さ せ た ア デ ノ ウ イ ル ス ベ ク タ ー を made し た. Tk を 単 alone で 発 now さ せ る ア デ ノ ウ イ ル ス ベ ク タ ー に than べ て, today back into し た ベ ク タ ー に よ る tk の は 発 now quantity with degree で あ っ た. し か し discharge, MCP - 1 は, MCP - 1 but 伝 単 発 alone now ベ ク タ ー に compare し て し, today back to た ベ ク タ ー は about 1/10 degree で あ っ た. し か し, ヒ ト liver が ん cell lines を vaccination し た ヌ ー ド マ ウ ス の に inside swollen sores, こ の ベ ク タ ー を vaccination し て, ガ ン シ ク ロ ビ ー ル を body shots and す る と, swollen sores 壊 death factor の を with い, マ ク ロ フ ァ ー ジ dependency に, swollen sores が completely に retreat す る こ と が recognize め ら れ た. し た が っ て, MCP - 1 を い た heritage 伝 child therapy の occasions に は, 発 さ れ る low MCP - 1 quantity が く て も, target cells の mobilization, activeness を lead き up こ す こ と が で き る possibility が あ る と exam え ら れ た. さ ら に, cell membrane に 発 now す る MCP - 1 キ メ ラ protein を 発 now す る ア デ ノ ウ イ ル ス ベ ク タ ー を open 発 し, こ の ベ ク タ ー の cast with に よ っ て, cell membrane に bioactive を retain す る MCP - 1 が 発 now し て い る こ と を confirm し た.

项目成果

Lu P, Nakamoto Y, Nemoto-Sasaki Y, Fujii C, Wang H, Hashii M, Ohmoto Y, Kaneko S, Kobayashi K, Mukaida N.: "Potential interaction between CCR1 and CCL3, induced by endogenously produced interleukin-1, in human hepatomas"American Journal of Pathology. (in

Lu P、Nakamoto Y、Nemoto-Sasaki Y、Fujii C、Wang H、Hashii M、Ohmoto Y、Kaneko S、Kobayashi K、Mukaida N.：“由内源性产生的白细胞介素 1 诱导的 CCR1 和 CCL3 之间的潜在相互作用，

Kitamura K., Nakamoto Y, Akiyama A, Kondo T, Kobayashi K, Kaneko S, Mukaida N.: "Pathogenic roles of tumor necrosis factor receptor p55-mediated signals in dimethylnitrosamine-induced murine liver fibrosis"Laboratory Investigation. 82. 571-583 (2002)

Kitamura K.、Nakamoto Y、Akiyama A、Kondo T、Kobayashi K、Kaneko S、Mukaida N.：“肿瘤坏死因子受体 p55 介导的信号在二甲基亚硝胺诱导的小鼠肝纤维化中的致病作用”实验室研究。

Ishida Y, Kondo T, Ohshima T, Fujiwara H, Iwakura Y, Mukaida N: "A pivotal involvement of IFN-γ in the pathogenesis of acetaminophen-induced acute liver injury"FASEB Journal. 16. 1227-1236 (2002)

Ishida Y、Kondo T、Ohshima T、Fujiwara H、Iwakura Y、Mukaida N：“IFN-γ 在对乙酰氨基酚诱导的急性肝损伤发病机制中的关键参与”FASEB 杂志 16. 1227-1236 (2002)。

Mukaida N, Ketlinsky SA, Matsushima K.: "Interleukin-8 and other CXC chemokines In Cytokine Handbook (Thomson A and Lotze MT eds.)"Academic Press (in press).

Mukaida N、Ketlinsky SA、Matsushima K.：“细胞因子手册中的白细胞介素 8 和其他 CXC 趋化因子（Thomson A 和 Lotze MT 编辑）”学术出版社（正在印刷中）。

Wang H, Nemoto-Sasaki Y, Kondo T, Akyama M, Mukaida N.: "Potential involvement of monocyte chemoattractant protein (MCP)-1/CCL2 in IL-4-mediated tumor immunity through inducing dendritic cell migration into the draining"International Immunopharmaology. (i

Wang H、Nemoto-Sasaki Y、Kondo T、Akyama M、Mukaida N.：“单核细胞趋化蛋白 (MCP)-1/CCL2 通过诱导树突状细胞迁移至引流管，可能参与 IL-4 介导的肿瘤免疫”国际