がん細胞選択的発現ベクターによる、ケモカイン遺伝子治療法の基礎的検討

使用癌细胞选择性表达载体进行趋化因子基因治疗的基础研究

• 批准号: 14030030
• 负责人: 向田 直史
• 金额: $ 3.78万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14030030/
• 关键词: 単球走化因子; アデノウイルスベクター; ケモカイン; フラクタルカイン; キメラ蛋白; マクロファージ; チミディン・キナーゼ; ガンシクロビール

従来の研究成果から、単球走化因子(MCP-1)遺伝子導入したがん細胞株の腫瘍形成能・転移能が低下することが明らかになっている。本年度は、MCP-1による遺伝子治療法の基礎的検討のために、(1)腫瘍免疫成立過程でのMCP-1の役割(2)自殺遺伝子併用によるMCP-1遺伝子治療法によるがん退縮効果の機序を検討した。その結果、(1)IL-4遺伝子導入colon 26細胞の腫瘍拒絶過程において、IL-4遺伝子導入株を接種したマウスの所属リンパ節では、MCP-1の発現が誘導される結果、抗原提示能を有するMCP-1レセプターを保有する樹状細胞が所属リンパ節へと動員され、腫瘍が効果的に拒絶されることを示唆する結果を得られた。(2)CAGプロモーター下流にチミディン・キナーゼ(tk)遺伝子とMCP-1遺伝子とを、IRES配列をはさんだ形で並列して連結させたアデノウイルスベクターを作成した。tkを単独で発現させるアデノウイルスベクターに比べて、今回作成したベクターによるtkの発現量は同程度であった。しかし、MCP-1産生量は、MCP-1遺伝子単独発現ベクターに比較して、今回作成したベクターは約1/10程度であった。しかし、ヒト肝がん細胞株を接種したヌードマウスの腫瘍内に、このベクターを接種して、ガンシクロビールを全身投与すると、腫瘍壊死因子の産生を伴い、マクロファージ依存性に、腫瘍が完全に退縮することが認められた。したがって、MCP-1を用いた遺伝子治療法の場合には、発現されるMCP-1量が低くても、標的細胞の動員・活性化を引き起こすことができる可能性があると考えられた。さらに、細胞膜に発現するMCP-1キメラ蛋白を発現するアデノウイルスベクターを開発し、このベクターの投与によって、細胞膜に生物活性を保有するMCP-1が発現していることを確認した。

As a result of the research, the tumor-forming and transmigration abilities of the cell lines introduced into the MCP-1 gene were reduced. This year's review of the basics of the MCP-1 による漝子 treatment method and (1) the process of establishing tumor immunity でのMCP -1の伝管 (2) commit suicide and use the によるMCP-1 伝子 treatment method with the withdrawal effect of the machine sequence を検した.そのResults, (1) IL-4 gene was introduced into colon 26-cell tumor rejection process, IL-4 gene-introduced strain vaccination, MCP-1 induction, antigen prompt Noble MCP-1レセプターをKeeping dendritic cells belongs to リンパ节へとmobilization され, swelling が effect に refusal されることをshows instigation する results をgets られた. (2) CAG プロモーターIndecent にチミディン・キナーゼ (tk) 缝子とMCP-1 缝子とを、IRES arrangement をはさんだshaped でJuxtaposed してconnected させたアデノウイルスベクターをmade した. tkを単多で発成させるアデノウイルスベクターに比べて、 This time, I will make the same amount of work as the original one.しかし, the amount of MCP-1 produced is は, the MCP-1 leftover ベクターに is compared with して, and the したベクターは is made about 1/10 degree であった. Inoculation of Hepatitis liver cell line and Hepatitis liver cell line The skin inside the ulcer, the vaccination of the skin, the full range of vaccinations The body is involved in the disease, the production of the tumor death factor is accompanied by the disease, the disease is dependent on the disease, and the disease is completely retracted and the disease is recognized.したがって、MCP-1をWhen using the いた缝子treatment method, the amount of MCP-1 is low. The possibility of mobilization and activation of target cells is determined.さらに、Cell membrane に発appears するMCP-1キメラprotein を発appears するアデノウイルスベクターを开発し、このベクターのinvestment and によって, cell membrane and biological activity をmaintained するMCP-1 and が発appear していることをconfirmation した.

项目成果

Lu P, Nakamoto Y, Nemoto-Sasaki Y, Fujii C, Wang H, Hashii M, Ohmoto Y, Kaneko S, Kobayashi K, Mukaida N.: "Potential interaction between CCR1 and CCL3, induced by endogenously produced interleukin-1, in human hepatomas"American Journal of Pathology. (in

Lu P、Nakamoto Y、Nemoto-Sasaki Y、Fujii C、Wang H、Hashii M、Ohmoto Y、Kaneko S、Kobayashi K、Mukaida N.：“由内源性产生的白细胞介素 1 诱导的 CCR1 和 CCL3 之间的潜在相互作用，

Kitamura K., Nakamoto Y, Akiyama A, Kondo T, Kobayashi K, Kaneko S, Mukaida N.: "Pathogenic roles of tumor necrosis factor receptor p55-mediated signals in dimethylnitrosamine-induced murine liver fibrosis"Laboratory Investigation. 82. 571-583 (2002)

Kitamura K.、Nakamoto Y、Akiyama A、Kondo T、Kobayashi K、Kaneko S、Mukaida N.：“肿瘤坏死因子受体 p55 介导的信号在二甲基亚硝胺诱导的小鼠肝纤维化中的致病作用”实验室研究。

Ishida Y, Kondo T, Ohshima T, Fujiwara H, Iwakura Y, Mukaida N: "A pivotal involvement of IFN-γ in the pathogenesis of acetaminophen-induced acute liver injury"FASEB Journal. 16. 1227-1236 (2002)

Ishida Y、Kondo T、Ohshima T、Fujiwara H、Iwakura Y、Mukaida N：“IFN-γ 在对乙酰氨基酚诱导的急性肝损伤发病机制中的关键参与”FASEB 杂志 16. 1227-1236 (2002)。

Mukaida N, Ketlinsky SA, Matsushima K.: "Interleukin-8 and other CXC chemokines In Cytokine Handbook (Thomson A and Lotze MT eds.)"Academic Press (in press).

Mukaida N、Ketlinsky SA、Matsushima K.：“细胞因子手册中的白细胞介素 8 和其他 CXC 趋化因子（Thomson A 和 Lotze MT 编辑）”学术出版社（正在印刷中）。

Wang H, Nemoto-Sasaki Y, Kondo T, Akyama M, Mukaida N.: "Potential involvement of monocyte chemoattractant protein (MCP)-1/CCL2 in IL-4-mediated tumor immunity through inducing dendritic cell migration into the draining"International Immunopharmaology. (i

Wang H、Nemoto-Sasaki Y、Kondo T、Akyama M、Mukaida N.：“单核细胞趋化蛋白 (MCP)-1/CCL2 通过诱导树突状细胞迁移至引流管，可能参与 IL-4 介导的肿瘤免疫”国际