がん細胞選択的発現ベクターによる、ケモカイン遺伝子治療法の基礎的検討

使用癌细胞选择性表达载体进行趋化因子基因治疗的基础研究

基本信息

批准号：
14030030
负责人：
向田直史
金额：
$ 3.78万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

従来の研究成果から、単球走化因子(MCP-1)遺伝子導入したがん細胞株の腫瘍形成能・転移能が低下することが明らかになっている。本年度は、MCP-1による遺伝子治療法の基礎的検討のために、(1)腫瘍免疫成立過程でのMCP-1の役割(2)自殺遺伝子併用によるMCP-1遺伝子治療法によるがん退縮効果の機序を検討した。その結果、(1)IL-4遺伝子導入colon 26細胞の腫瘍拒絶過程において、IL-4遺伝子導入株を接種したマウスの所属リンパ節では、MCP-1の発現が誘導される結果、抗原提示能を有するMCP-1レセプターを保有する樹状細胞が所属リンパ節へと動員され、腫瘍が効果的に拒絶されることを示唆する結果を得られた。(2)CAGプロモーター下流にチミディン・キナーゼ(tk)遺伝子とMCP-1遺伝子とを、IRES配列をはさんだ形で並列して連結させたアデノウイルスベクターを作成した。tkを単独で発現させるアデノウイルスベクターに比べて、今回作成したベクターによるtkの発現量は同程度であった。しかし、MCP-1産生量は、MCP-1遺伝子単独発現ベクターに比較して、今回作成したベクターは約1/10程度であった。しかし、ヒト肝がん細胞株を接種したヌードマウスの腫瘍内に、このベクターを接種して、ガンシクロビールを全身投与すると、腫瘍壊死因子の産生を伴い、マクロファージ依存性に、腫瘍が完全に退縮することが認められた。したがって、MCP-1を用いた遺伝子治療法の場合には、発現されるMCP-1量が低くても、標的細胞の動員・活性化を引き起こすことができる可能性があると考えられた。さらに、細胞膜に発現するMCP-1キメラ蛋白を発現するアデノウイルスベクターを開発し、このベクターの投与によって、細胞膜に生物活性を保有するMCP-1が発現していることを確認した。

先前的研究发现表明，用单核细胞趋化因子（MCP-1）基因转染的癌细胞系的致瘤和转移潜力降低。在今年，为了使用MCP-1从根本上检查基因治疗，我们研究了（1）MCP-1在肿瘤免疫建立过程中的作用（2）使用自杀基因的MCP-1基因治疗的癌症回归效应机理。结果，在IL-4转基因结肠26细胞的肿瘤排斥过程中，在接种IL-4转基因菌株接种的小鼠的区域淋巴结中诱导了MCP-1的表达，从而导致抗抗原呈现能力的MCP-1的树突状细胞被释放到良好的淋巴结中，从而使抗原呈现能力被拒绝。（2）创建了腺病毒载体，其中胸苷激酶（TK）基因和MCP-1基因与IRES序列夹在CAG启动子的下游并联。与单独表达TK的腺病毒载体相比，这次创建的矢量的TK表达水平大致相同。然而，与单独的MCP-1基因相比，这次产生的MCP-1量约为载体产生的1/10。然而，当接种人肝癌细胞系接种该载体并与ganciclobeer进行系统给药时，发现产生肿瘤坏死因子，并以巨噬细胞依赖性方式完全缩回肿瘤。因此，人们认为，在使用MCP-1的基因治疗的情况下，即使表达的MCP-1量较低，也可能导致靶细胞的募集和激活。此外，开发了一种腺病毒载体，该腺病毒载体表达在细胞膜上表达的MCP-1嵌合蛋白，并且通过给予该载体，可以证实具有生物学活性的MCP-1在细胞膜中表达。