時間制御型遺伝子発現ベクターの開発

时间控制基因表达载体的开发

• 批准号: 18659042
• 负责人: 大戸 茂弘
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659042/
• 关键词: 時計遺伝子; 生体リズム; ベクター; 時間薬理; 時間治療

本研究では、生体リズムの分子制御メカニズムを応用し、蛋白あるいは遺伝子をリズミカルに発現できるリズム発振ベクターを作製した。まずプロモーター上流域に時計遺伝子応答配列を含む合成レポーターベクターを作製した。挿入配列は、時計遺伝子の5'上流域に存在する時計遺伝子応答配列を基に設計した。次にルシフェラーゼレポーターベクターをC6細胞ヘトランスフェクトし、36-48時間後にDexamethazone(DEX)刺激により細胞を同調した。同調後、基質であるルシフェリンを添加し、細胞から発せられる化学発光強度を微弱発光検出器で経時的に測定した。その後、ルシフェラーゼレポーターベクターを各時計遺伝子の発現ベクターと共に、C6細胞またはHepG2細胞ヘトランスフェクトし、48時間培養後ルシフェラーゼ活性をルミノメーターで測定した。既存の時計遺伝子のレポーターベクターのリズム発振機能を検討したところ、それぞれのベクターから発せられる化学発光強度には約24時間周期のリズムが認められ、バイオルミネセント法によるリズム機能評価系の妥当性が確認された。次に、時計遺伝子応答配列を含む合成レポーターベクターを作製し、デュアルルシフェラーゼアッセイにより時計遺伝子への反応性について検討した。その結果、転写促進因子による転写活性の上昇と転写抑制因子による転写活性の低下が確認され、さらに、バイオルミネセント法によって各合成ベクターは既存の時計遺伝子と同様のリズム発振機能を有することが明らかになった。本研究では、時計遺伝子応答配列を基に、リズムを発振するベクターの作製に成功した。今後、目的とする遺伝子のリズミカルな発現について更に詳細な機能評価を行うことで、時間薬物送達システムへの応用が期待される。

In this study, the molecular control system of the organism was used to control the development of the protein. The time table of the river basin is composed of the following components: The timing of the time series is based on the design of the time series in the 5'upper basin. C6 cells were stimulated with dexamethasone (DEX) 36-48 hours later. After synchronization, the matrix is added, the chemical emission intensity is measured by the weak emission detector. After incubation for 48 hours, the activity of HepG2 cells was measured. The adequacy of the evaluation system for the function of the existing time-dependent component is confirmed by the evaluation of the chemical emission intensity of the existing time-dependent component for the chemical emission of the existing time-dependent component for about 24 time periods. In addition, the timing of the transmission of information is included in the synthesis of information, information and information, and the timing of the transmission of information is included in the analysis. As a result, an increase in writing activity due to a writing promotion factor and a decrease in writing activity due to a writing inhibition factor were confirmed. This study is based on the analysis of the time series and the success of the system. In the future, the purpose of the project is to develop a detailed functional evaluation of the project, and the time for delivery of the project is expected.

项目成果

Basis for dosing time-dependent change in the anti-tumor effect of imatinib in mice.

• DOI: 10.1016/j.bcp.2006.08.002
• 发表时间: 2006-11
• 期刊: Biochemical pharmacology
• 影响因子: 5.8
• 作者: Hiroo Nakagawa;Takako Takiguchi;Mariko Nakamura;A. Furuyama;S. Koyanagi;H. Aramaki;S. Higuchi;S. Ohdo

Glucocorticoid regulation of 24-hour oscillation in interferon receptor gene expression in mouse liver

糖皮质激素对小鼠肝脏干扰素受体基因表达24小时振荡的调节

• 发表时间: 2006
• 期刊: Endocrinology 147・11
• 作者: Koyanagi S;et al.
• 通讯作者: et al.