精神発達障害緩和分子同定のための一卵性双生児間エピゲノム比較アプローチ

使用同卵双胞胎之间的比较表观基因组方法来识别缓解精神发育障碍的分子

基本信息

批准号：
19659261
负责人：
久保田健夫
金额：
$ 2.05万
依托单位：
University of Yamanashi
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19659261/
关键词：
遺伝学遺伝子ゲノム脳神経疾患発現制御

项目摘要

本研究の目的は、ゲノムを共有する一卵性双子間でも存在するエピゲノムの差異が存在する最近の知見を背景とする、レット症候群の一卵性双子例を対象にした精神発達障害の新規関連遺伝子を探索することである。具体的には、双子間のエピゲノム(DNAメチル化パターン)差異領域を特定し、その中から本症候群の責任蛋白質(MeCP2)によって調節されるメチル化遺伝子を見いだし、最終的に双子間での発現差異を明らかにする。平成20年度は、この目的を達成させるために、ゲノムマイクロアレイ装置で解析する試料の調整法の確立,ならびに調整された試料を用いた解析を行った。具体的にはメチル化DNAを選択的に吸着し濃縮させる,チル化DNA結合タンパク質(MBD2b)のカラムを用いて濃縮し、濃縮されたDNAサンプルにおいて、前年度に明らかにした材料であるヒトリンパ球における高メチル化領域がみられ、低メチル化領域がみられないことを、定量リアルタイムPCRにより確認した。その結果、Bisulfite sequencing法で高メチル化が認められたCDX1, PNLDC, HISTIH2BA遺伝子領域は濃縮され、同法で低メチル化が認められたPTTGIP, STCH遺伝子領域やCpGを含まないAGEH遺伝子領域は濃縮されていなかった。以上より、MBD2bのカラムはメチル化領域を選択的に濃縮していると考え、これを用いてアレイ解析を行った。その結果、高メチル化が予想される領域はメチル化が高く描出された。この基礎的研究成果をふまえ、双子間比較を行い、症状の差異に関連する遺伝子を見いだす予定である。

这项研究的目的是基于最近的发现，即使在共享基因组的相同的双胞胎中也存在差异，探索RETT综合征单卵双胞胎的精神发育障碍的新基因。具体而言，鉴定出双胞胎之间的差异表观基因组（DNA甲基化模式）的区域，并发现了该综合征负责蛋白（MECP2）调节的甲基化基因（MECP2），并且最终揭示了双胞胎之间的表达差异。在2008年，为了实现这一目标，我们建立了一种方法，可以准备使用基因组微阵列设备分析样品，并使用调整后的样品进行分析。具体而言，使用一列Tylated DNA结合蛋白（MBD2B）进行浓度，该蛋白有选择地吸附和浓缩甲基化的DNA，并且定量实时PCR证实，浓缩的DNA样品表现出过度甲基化的区域和人淋巴细胞中的次甲基化区域，在先前的材料中显示出来。结果，通过甲硫酸盐测序方法高度甲基化的CDX1，PNLDC和HistiH2BA基因区域被富集，而PTTGIP，STCH基因区域和AgeH基因区域以及由Bisulfite测序方法通过Bisulfite测序方法，pttgip，Sthyl of pttgip，Stch ways thath ways thath wed wath wed wath ways thathy thathy thathy thathy thathy thathy thath thathy thathy thathy thathy thathy thathy thathy thath thathy thaty phsect，测序方法和未含有CpG的AGEH基因区域没有富集。从上面，人们认为甲基化区域选择性地集中在MBD2B的列上，并使用此甲基化区域进行了阵列分析。结果，预计用高甲基化描绘了高甲基化的区域。根据这项基础研究的结果，我们将进行双胞胎与查找与症状差异有关的基因。