新規に開発された脱落膜特異的遣伝子導入法を用いた着床メカニズムの研究

利用新开发的蜕膜特异性基因导入方法研究着床机制

• 批准号: 19659422
• 负责人: 岡部 勝
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19659422/
• 关键词: 胎盤; 脱落膜; レンチウイルスベクター; 遺伝子操作動物

着床や胎盤形成メカニズムの解明を目的として、近年では遺伝子操作動物を利用した研究も試みられているが、既存の遺伝子導入(TG)や遺伝子欠損(KO)法では胎盤のみならず胎児の遺伝子も操作されてしまう。胎児に遺伝子を導入することなく胎盤や脱落膜のみを遺伝子操作できれば様々な応用が期待される。我々はこれまでにレンチウイルス(LV)ベクターがマウス初期胚への遺伝子導入に優れたベクターであることを報告している。本研究では(1)胚盤胞期胚の最外層を形成する栄養外胚葉細胞が胎盤へ分化する性質を利用し、LVベクターを胚盤胞に感染させることで胎盤特異的に遺伝子操作する。(2)着床期の胚が母体由来の脱落膜に包み込まれていることに着目し、子宮内にLVベクターを注入することで脱落膜のみに遺伝子を導入する。といった新しい手法を開発し胎盤や脱落膜の機能を分子生物学的に解明することを試みた。レポーターとしてEGFPを発現するLVベクターを調製し、酸性タイロード処理により透明帯を除去した胚盤胞に感染させて偽妊娠マウスの子宮に移植した。胎生13.5日目に解剖したところ、胎児への遺伝子導入は確認されず胎盤のみに緑色蛍光が検出された。胎盤特異的な遺伝子導入はPCR解析によっても確認された。またこの方法を応用することで、胎盤異常が原因で胎児が死亡するようなKOマウスをレスキューし産仔を得ることができた。さらに着床期の子宮内にLVベクターを注入することで脱落膜のみに遺伝子を導入できることも明らかにしたが、現時点では適当なモデルマウスが見つからず脱落膜特異的な遺伝子操作により流産を防ぐという具体的な例を示すことはできなかった。しかしレポーターレベルではあるが、これまでに報告のない脱落膜特異的な遺伝子操作が可能であることが示されたので、今回の結果は今後、脱落膜において重要な役割を果たす遺伝子の探索や機能解析に役立つと考えられる。

In recent years, the use of genetic manipulation in animals has been studied. Existing genetic manipulation (TG) and genetic defect (KO) methods have been used to reverse the genetic manipulation of placenta and fetus. Fetal DNA transfer is expected to be performed on the placenta and exfoliated membrane. We will report to you on the introduction of the gene in the initial stage of development. This study includes: (1) the formation of the outermost layer of the blastoderm embryo, the development of ectodermal cells, the utilization of placental differentiation properties, the infection of the blastoderm cells, and the operation of placenta-specific embryos. (2)During implantation, the embryo is injected into the uterus, and the embryo is injected into the uterus. A new approach to the development of placental exfoliation membrane function is proposed. In addition to the above, we also found that there was no significant difference between the two groups. The embryo was dissected on day 13.5, and the embryo was introduced into the placenta and the green light was detected. Placenta specific DNA was introduced and analyzed by PCR. The method of birth control is to determine the cause of fetal death. During implantation, LV cells are injected into the uterus, and exfoliated membrane cells are introduced into the uterus. At this time, the appropriate cells are introduced into the uterus. Specific examples of exfoliated membrane cells are shown. The results of this study are as follows: (1) The results of this study are as follows: (2) The results of this study are as follows:

项目成果

PGC7/Stella protects against DNA demethylation in early embryogenesis

• DOI: 10.1038/ncb1519
• 发表时间: 2007-01-01
• 期刊: NATURE CELL BIOLOGY
• 影响因子: 21.3
• 作者: Nakamura, Toshinobu;Arai, Yoshikazu;Nakano, Toru
• 通讯作者: Nakano, Toru

Lats2 is an essential mitotic regulator required for the coordination of cell division

• DOI: 10.1074/jbc.m608562200
• 发表时间: 2007-06-29
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Yabuta, Norikazu;Okada, Nobuhiro;Nojima, Hiroshi
• 通讯作者: Nojima, Hiroshi

Complementation of placental defects and embryonic lethality by trophoblast-specific lentiviral gene transfer

• DOI: 10.1038/nbt1280
• 发表时间: 2007-02-01
• 期刊: NATURE BIOTECHNOLOGY
• 影响因子: 46.9
• 作者: Okada, Yuka;Ueshin, Yuko;Ikawa, Masahito
• 通讯作者: Ikawa, Masahito

Possible involvement of CD81 in acrosome reaction of sperm in mice

• DOI: 10.1002/mrd.20709
• 发表时间: 2008-01
• 期刊: Molecular Reproduction and Development
• 影响因子: 2.5
• 作者: Maya Tanigawa;Kiyoko T. Miyamoto;Satoshi Kobayashi;Masahiro Sato;H. Akutsu;M. Okabe;E. Mekada;K. Sakakibara;M. Miyado;A. Umezawa;K. Miyado

PGAP1 knock-out mice show otocephaly and male infertility

• DOI: 10.1074/jbc.m705601200
• 发表时间: 2007-10-19
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Ueda, Yasutaka;Yamaguchi, Ryo;Kinoshita, Taroh
• 通讯作者: Kinoshita, Taroh