RNAiを用いた遺伝子ノックアウト(ノックダウン)マウスの作製

使用 RNAi 生成基因敲除 (knockdown) 小鼠

• 批准号: 15650078
• 负责人: 岡部 勝
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15650078/
• 关键词: RNAi; トランスジェニックマウス; tRNAプロモータ; polIIIプロモータ; サイレンシング; GFP

RNAi-TGの系はマウスだけでなくラットにおいても応用可能であることがすでに分かっている。そのためES細胞がないような動物種においても、RNAi-TGの系を使うことにより個体における遺伝子の機能解析ができる可能性が出てきた。しかしながら、これまでにsiRNAが発現しない個体が出現することやRNAi効果が加齢とともに減弱するといった問題点も分かっており、RNAi-TG法はまだ完成された方法ではない。そこでわれわれはこれらの原因として、プロモーターの不安定さや発現量の少なさを考え、培養細胞を用いた系ですでに有効性が証明されているtRNAプロモーターを用いてRNAi-TGマウスを作製し、マウス個体におけるRNAiをより詳細に解析することを目的に実験を行なった。tRNAプロモーターによるRNAiトランスジェニックマウスを作製し、ファウンダーマウス及びF1マウス個体においてRNAi効果を確認した。その結果、(1)世代を経ることにより、RNAiトランスジーンを持っているにも関わらずsiRNAが発現しない個体が出現し、そのような個体においてRNAi効果は見られなくなることを確認した。(2)いったんsiRNAが発現しなくなった親からsiRNAの発現が回復した子供は得られなかった。(3)EGFPの発現が非常に強力なグリーンマウスにおいて、EGFPに対するRNAi効果は加齢とともに減弱することを確認した。(4)EGFPの発現がより低いLG-002マウスを用いるとEGFPに対する持続的なRNAi効果があることが確認された。

RNAi-TG can be used in different ways. The possibility of analyzing the function of ES cells in different animal species and RNAi-TG systems is discussed. The RNAi method was developed by the RNAi-TG method. The RNAi-TG method was developed by the RNAi-TG method. The reason for this is that there is a small amount of instability in the culture of cells, and there is evidence that there is a small amount of tRNA in the culture of cells. The RNAi effect is identified in the tRNA and F1. Results: (1) Generation history, RNAi history. (2)The siRNAs were detected and recovered. (3)EGFP discovery is very strong, EGFP discovery is very weak. (4)EGFP discovery is confirmed by LG-002.

项目成果

Gene Silencing by RNA Interference

RNA 干扰基因沉默

• 发表时间: 2004
• 作者: 蓮輪 英毅 ほか;H.Hasuwa et al.
• 通讯作者: H.Hasuwa et al.

RNAiを用いた個体レベルの遺伝子ノックダウン

使用 RNAi 进行个体水平的基因敲除

• 发表时间: 2004
• 期刊: 医学のあゆみ 208(8)
• 作者: 蓮輪 英毅 ほか

MMETHODS IN MOLECULAR BIOLOGY Ribozymes and siRNA Protocols second edition

分子生物学中的方法核酶和 siRNA 方案第二版

• 发表时间: 2004
• 作者: 蓮輪 英毅 ほか;H.Hasuwa et al.;H.Hasuwa et al.
• 通讯作者: H.Hasuwa et al.

蓮輪 英毅, 岡部 勝: "RNAiノックダウンマウスの作製"Medaical Science Digest. 29(11). 28-31 (2003)

Hideki Hasuwa，Masaru Okabe：“RNAi 敲除小鼠的产生”《医学科学文摘》29(11)。

蓮輪 英毅, 岡部 勝: "マウス個体におけるRNAi"遺伝子医学. 7(3). 59-64 (2003)

Hideki Hasuwa，Masaru Okabe：“个体小鼠的 RNAi”遗传医学 7(3)。