权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

ローカリゼーションシグナルトラップ法の開発と、細胞分化に関する遺伝子群の解析

定位信号捕获方法的开发和细胞分化相关基因组的分析

基本信息

批准号：
10878133
负责人：
岡部勝
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

目的蛋白質とEGFPの融合蛋白質が本来の細胞内局在と同じかどうかを調べる基礎検討を行うために、細胞周期依存的に細胞質から核内に移行する Haspin と EGFP の融合蛋白質を培養細胞に発現させてその動向を観察した。その結果、融合蛋白質も Haspin と同様に細胞周期に依存して細胞質と核内を行き来することを確認した。さらにその様子は細胞を生かしたまま経時的に観察することが可能であった。上記実験とは別に、精子先体(分泌小胞)内に存在するアクロシンのシグナルペプチドをつないだEGFPを発現するトランスジェニックマウスを作製したところ、予想通り、EGFPが精子の先体内腔に局在した。またその精子を用いることにより、受精に必須の過程である先体反応の間に先体内腔からEGFPが放出される様子を経時的に観察することができた。以上の点から、EGFPとの融合蛋白質が目的蛋白質と同様の局在を示すことを確認し、論文報告した。今年度は、精巣で発現する遺伝子のcDNAライブラリーを構築したが、そのベクターにEGFP遺伝子を組み込んで精巣蛋白質とEGFPの融合蛋白質を発現する発現ライブラリーの作製には至っていない。今後も実験を続け、ライブラリー完成後は精巣由来細胞株であるF9に導入してEFGPの蛍光をもとにスクリーニングを開始する予定である。

Objective: To observe the development of Haspin and EGFP fusion proteins in cultured cells, which are originally located in the same cell, regulated in the same cell cycle, and regulated in the same cell cycle. The results of fusion protein Haspin homology are confirmed by cytoplasmic and nuclear processes. The child is born in the middle of the night. Note that the sperm precursor (secretory vesicle) exists in the sperm precursor (secretory vesicle), and the EGFP precursor cavity exists in the sperm precursor cavity. The sperm is used in the process of fertilization, and the precursor is released in the lumen. The fusion protein of EGFP and the target protein are confirmed in this paper. This year, the cDNA sequence of the gene was constructed and the EGFP gene was assembled. The fusion protein of the gene and EGFP was developed. In the future, after the completion of the process, the cells from which the sperm is derived will be introduced into F9 and the cells from which the EFGP is derived will be introduced into F9.