免疫電顕を用いたナトリウム利尿ペプチドファミリ-の心筋細胞内超徴形態の解析

免疫电镜分析心肌细胞利尿钠肽家族的超特征形态

• 批准号: 03454253
• 负责人: 藤原 久義
• 金额: $ 3.78万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03454253/
• 关键词: ANP; BNP; immunocytochemical; immunohistochemical

本研究の目的は1)ANPとBNPが心筋細胞内のどこに存在するのか、2)ANPとBNPはどの特異顆粒にも共存して存在するのかまたはそれぞれ別個の特異顆粒に存在するのか、3)ANP、BNPが心の負荷により増大するとき同時に心筋細胞内の特異顆粒も増えるのかという問題を解明することである。対象はブタおよびヒトの心房ならびに心室筋である。ヒトの場合は手術で得られた心房筋および心内膜心筋生検時の心室筋を用いた。方法としてまずヒト、ブタのANPとBNPに対するモノクロナ-ル抗体を作製し、金コロイドでラベルした。ヒト・ブタの心房・心室筋をサンボニ-固定した后電顕包埋し、超薄切片を作製した。大小(10nmと5nm)2種類の金コロイドでラベルしたANPとBNPのモノクロナ-ル抗体を超薄切片にのせ切片の表と裏で心筋組織と免疫反応させ、電顕にて観察した。結果および考察:心房筋ではヒト・ブタ共に2重免疫電顕によりANPのみを含む顆粒(type 1)とANPとBNPが共存する顆粒(type 2)が認められた。これら2種の顆粒に形態学的な差(大きさや濃度など)認められなかった。ほぼすべての心房筋細胞でこの2種類の顆粒は混在していたが、type 1とtype 2の比は場所により大きく異なっていた。すなわち内膜側ではtype 2が多く、外膜側ではtype 1の顆粒が多かった。顆粒における金コロイドの密度はANPにおいては比較的一定であったが、BNPにはかなりばらつきがあった。心室においてはヒトの拡張型心筋症の左心の生検組織で顆粒が発見された。それらはすべてAND・BNP両者を共に有するtype 2の顆粒であった。顆粒の量は心機能、特に収縮能とよく相関した。以上より心筋細胞はwall stressに反応して増大するsiーngle、multipotentialな細胞の集団であり、ANPとBNPは心筋細胞内の特異顆粒中に貯蔵され負荷時には同一顆粒内に ANPとBNPが共に含まれるtype 2の顆粒が増大する。

The objectives of this study were: 1) to clarify the existence of ANP and BNP in cardiac muscle cells; 2) to clarify the coexistence of ANP and BNP in specific granules; 3) to clarify the increase of ANP and BNP in cardiac load and the increase of specific granules in cardiac muscle cells. The heart and the heart are the same. The heart muscle is the heart muscle, and the heart muscle is the heart muscle. The method is to control the reaction between ANP and BNP, and to control the reaction between ANP and BNP. The heart and the ventricle were fixed and then embedded. The size (10nm to 5nm) of the two types of gold nanoparticles was determined by the anti-ANP and anti-BNP antibodies. The ultra-thin sections of the tissue were observed by the immune reaction and electrophotography. The results showed that there were two kinds of immune responses: ANP and BNP. The morphological differences between the two species were identified. The two kinds of particles in the atrial muscle cells are mixed in different places, type 1 and type 2. The inner membrane side is type 2 and the outer membrane side is type 1. The density of particles is different from ANP and BNP. The left ventricular tissue particles are found in the left ventricular tissue of the dilated cardiomyopathy. All kinds of particles have the same type. Particle size is related to heart function and specific contraction energy. In addition, the size of ANP and BNP in the same granule increased when the wall stress of the muscle cells increased.

项目成果

Hasegawa K,Fujiwara H et al: "Light and electron microscopic locarization of brain natriuretic peptide in relation to atrial natriuretic peptide in porcine atrium" Circulation. 84. 1203-1209 (1991)

Hasekawa K、Fujiwara H 等人：“光和电子显微镜定位与猪心房中心房钠尿肽相关的脑钠尿肽”循环。

Matsuda M,Fujiwara H et al: "Failure to reduce infarct size by intracoronary infusion of recombinant human SOD at reperfusion in the porcine heart:Immunohistochemical analysis" J Mol Cell Cardiol. 23. 1287-1296 (1991)

Matsuda M、Fujiwara H 等人：“在猪心脏再灌注时通过冠状动脉内输注重组人 SOD 未能减少梗塞面积：免疫组织化学分析”J Mol Cell Cardiol。

Takemura G,Fujiwara H et al: "Expression and distribution of strial natriuretic peptide in human hypertrophic ventricle of hypertensive hearts and hearts with HCM" Circulation. 83. 181-190 (1991)

Takemura G、Fujiwara H 等人：“高血压心脏和 HCM 心脏中心房钠尿肽的表达和分布”循环。

Hasegawa K,Fujiwara H et al: "Ventricular expression of atrial and brain natriuretic peptides in DCM" Am J Pathol.

Hasekawa K、Fujiwara H 等人：“DCM 中心房和脑钠尿肽的心室表达”Am J Pathol。