細胞外基質構成分が肝類洞の毛細血管化に果す役割についての分子生物学的研究

细胞外基质成分在肝窦毛细血管化中作用的分子生物学研究

• 批准号: 05670459
• 负责人: 高橋 達
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05670459/
• 关键词: フィブロネクチン; in situハイブリダイゼーション; 肝線維化; 類洞の毛細血管化

1.ヒト線維化肝のPLP固定凍結標本上の傍類洞部における細胞性(ED-A^+)フィブロネクチン,PG-PI,ラミニンの局在をそれぞれの抗原に特異的なモノクローナル抗体を用いて酵素抗体法にて光顕,電顕にて検討した結果,前二者がディッセ膣に豊富に存在しており、線維化の進展に伴って出現する類洞内皮細胞直下の基底膜様構造に一致してラミニンが出現増加することが判明した。2.フィグロネクチンのED-A領域ならびに共通配列の3'-,および5'-端に対応するオリゴヌクレオチドをプライマーとして、ヒトフィブロネクチンcDNAであるpFHIIIをテンプレートとして、それぞれの部分配列cDNAをPCR法により増幅した。またその際、digoxigemin-II-dUTPをPCR反応に加えることにより非放射性標識プローブを作製した。これらのプローブを用いて慢性肝疾患の肝生検組織標本上でin situハイブリダイゼーション法を施行した結果、ED-A^+mRNAは伊東細胞に、共通部分配列を有するフィグロネクチンmRNAは伊東細胞と肝細胞に局在がみられた。3.ヒト線維化肝の肝生検標本よりRNAzolで総RNAを抽出し、フィブロネクチンED-A領域特異的プライマーを用いてRT-PCR法によりED-A領域の発現を3%アガロースゲル電気泳動上で検討すると、ED-A領域に対応する270bpの単一なバンドが認められた。

1. ヒ ト line dimensions liver の fixation PLP frozen specimen の alongside such holes に お け る cell sex (ED - ^ + A) フ ィ ブ ロ ネ ク チ ン, PG - PI, ラ ミ ニ ン の bureau in を そ れ ぞ れ に の antigen specific な モ ノ ク ロ ー ナ を ル antibody with い て enzyme method of antibody に て 顕 light, electric 顕 に て beg し 検 た results, before both が デ ィ ッ セ vagina に aboundant に exist し て お り, line d の develops に っ て in す る class straight hole endothelial cells に の basement membrane others structure under consistent し て ラ ミ ニ ン が appear raised plus す る こ と が.at し た. 2. フ ィ グ ロ ネ ク チ ン の ED - A field な ら び に with common column の 3 '-- お よ び 5' - end に 応 seaborne す る オ リ ゴ ヌ ク レ オ チ ド を プ ラ イ マ ー と し て, ヒ ト フ ィ ブ ロ ネ ク チ ン cDNA で あ る pFHIII を テ ン プ レ ー ト と し て, そ れ ぞ れ の department assign column cDNA を PCR method に よ り rights of し た . ま た そ の interstate, digoxigemin - II - dUTP を PCR anti 応 に plus え る こ と に よ り non-radioactive logo プ ロ ー ブ を cropping し た. こ れ ら の プ ロ ー ブ を with い て in chronic liver disease の raw 検 で on tissue specimens in situ ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン method to execute し を た results, ED - A ^ + mRNA は Mr ITO cells に, common distribution list を す る フ ィ グ ロ ネ ク チ ン mRNA は Mr ITO cell と hepatocellular に bureau in が み ら れ た. 3. ヒ ト line dimensions specimens of liver の raw 検 よ り RNAzol で 総 RNA を spare し, フ ィ ブ ロ ネ ク チ ン ED - A domain specific プ ラ イ マ ー を with い て rt-pcr method に よ り ED - A field の 発 を now 3% ア ガ ロ ー ス ゲ ル electric 気 swimming on で す 検 please る と, ED - A field に 応 seaborne す る 270 bp の 単 A な バ Youdaoplaceholder0 ドが recognize められた.

项目成果

Takahashi T,Isemura M,Nakamura T,et al.: "Immunolocalization of a fibronectin-binding proteoglycan(PG-P1)in normal and fibrotic human liver." Journal of Hepatology. (in press). (1994)

Takahashi T、Isemura M、Nakamura T 等人：“正常和纤维化人类肝脏中纤连蛋白结合蛋白聚糖 (PG-P1) 的免疫定位。”