レトロウイルス・ベクターを用いた悪性グリオーマに対する遺伝子導入の基礎的研究

利用逆转录病毒载体基因转入恶性胶质瘤的基础研究

• 批准号: 05671150
• 负责人: 平川 公義
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05671150/
• 关键词: 悪性脳腫瘍; 免疫遺伝子治療; レトロウイルス・ベクター; サイトカイン; 腫瘍ワクチン

1、サイトカイン発現レトロウイルスベクターのパネルの作成マウスの各種サイトカインのcDNAをRT-PCR法でクローニングし塩基配列を確認した後、マウス白血病ウイルスに由来するレトロウイルスベクターへ組み込んだ。これをパッケージング細胞ψCRIPへトランスフェクトし、感染細胞のゲノムDNAのサザン分析を行って高力価のプロデューサー細胞クローンを樹立した。細胞一個当たり1.5コピー以上の高効率遺伝子導入が可能であった。サイトカインとしてはGM-CSF,IL-1,IL-2,IL-3,IL-4,IL-6,IL-10,TNF,LT,INF-γ,G-CSF,M-CSF,SCF,LIF,Oncostatin-M,MIF,及び接着分子のB7(CD28リガンド)のベクターを作成し、このパネルを用いて以下の動物実験を開始した。2、サイトカイン遺伝子導入腫瘍ワクチンを用いた移植脳腫瘍の予防実験マウスの低免疫原性メラノーマ株B16にサイトカイン遺伝子を導入してこれを高発現させた上で、10000radのX線照射により不活化し、腫瘍ワクチンとして同系マウスの皮下に投与した。一週間後非導入B16細胞500個を脳に移植し、脳腫瘍の生着を予防できるかどうかを検討した。ワクチンを投与されない群、及び非導入B16をワクチンとした群は全例20日前後で腫瘍死したのに対し、GM-CSFとIL-2またはGM-CSFとTNFを発現するワクチンを投与された群では有意な生存期間の延長を認め、一部のマウスは腫瘍を拒絶した。この結果は腫瘍ワクチン局所で発現されるサイトカインの働きで、宿主の抗腫瘍免疫能が誘導されたことによるものと考えられた。

1. The gene expression of leukemia is confirmed by RT-PCR of cDNA of all kinds of leukemia genes. The analysis of the DNA of infected cells was carried out in a high-powered way. A cell with a high efficiency gene introduction rate of 1.5 or more is possible. GM-CSF,IL-1,IL-2,IL-3,IL-4,IL-6,IL-10,TNF,LT,INF-γ,G-CSF,M-CSF,SCF,LIF,Oncostatin-M,MIF, and B7(CD28) were prepared and used in the following animals. 2. The introduction of the vector into the tumor cells and the prevention of the tumor cells from low immunogenicity in the B16 strain showed high response to X-ray irradiation at 10000rad. A week later, 500 non-transfected B16 cells were transplanted, and tumor growth was prevented. All of the cases were found to have been infected with GM-CSF and IL-2 before and after 20 days. The results showed that the host's anti-tumor immune function was induced by the virus.