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がんに対する新規免疫遺伝子治療の開発研究

新型癌症免疫基因疗法的研发

基本信息

批准号：
12F02773
负责人：
安川正貴
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Ehime University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012-04-01 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

がんに対する新たな免疫療法を開発する目的で下記の研究を遂行し成果が得られた。WT1特異的T細胞レセプター遺伝子（TCR）導入による遺伝子改変T細胞（WT1-TCR-T細胞）を用いた難治性白血病と骨髄異形成症候群に対する新規細胞免疫療法の開発：我々のグループが樹立したWT1特異的HLA-A24拘束性細胞傷害性T細胞（CTL）クローンからTCR遺伝子を単離し、その発現ベクターを構築した。タカラバイオ株式会社との共同研究によって、内在性TCR発現を抑制し、WT1特異的TCRを選択的に発現できるベクターを開発し、本研究ではこの発現ベクターを使用した。様々な実験を遂行し、下記の結果が得られた。１）WT1-TCR-T細胞は、元のCTLクローン同様、白血病細胞株ならびに患者から分離した白血病細胞をHLA-A24拘束性に直接認識し傷害した。２）ヒト白血病細胞移植ヒト化マウスの実験系を用いて検討したところ、WT1-TCR-T細胞を養子免疫することによって、ヒト白血病細胞の増殖を抑制した。さらに、ヒト化マウス継代実験によって、ヒト白血病幹細胞を排除できる可能性が示唆された。３）WT1-TCR-CD4陽性T細胞は、WT1特異的HLA-A24拘束性に、HLA class II分子を介して白血病細胞を直接認識し、Th1タイプのサイトカインを産生した。４）WT1-TCR-CD4陽性T細胞は、WT1-TCR-CD8陽性CTLの細胞傷害性を増強させ、白血病細胞へのトラフィッキングを誘導した。５）WT1-TCRをヒト造血幹細胞に遺伝子導入し、HLA-A24トランスジェニック免疫不全NSGマウスに移植した。その結果、WT1特異的HLA-A24拘束性CTLが、マウス体内で分化増殖することが示された。

The aim of the study is to develop new immunotherapy methods. WT1-specific T cell receptor (TCR) gene transfer and gene modified T cells (WT1-TCR-T cells) for use in refractory leukemia and osteogenesis syndrome New cellular immunotherapy development: We have established WT1-specific HLA-A24-binding cytotoxic T cells (CTL) gene transfer and gene development. In the joint research conducted by KARA, the intrinsic TCR development was suppressed, and the development of WT-1 specific TCR selection was developed. In this study, the development of TCR was used. The results of the study were recorded below. 1) WT1-TCR-T cells directly recognize HLA-A24 binding in leukemia cell lines isolated from patients. 2) Leukemia cell transplantation and development of leukemia cell lines were investigated in vitro and WT1-TCR-T cells were used to inhibit the proliferation of leukemia cells. The possibility of leukemia stem cells being excluded from the study was also discussed. 3) WT1-TCR-CD4 positive T cells are directly recognized by leukemia cells, and Th1-TCR-CD4 positive T cells are produced in response to WT1-specific HLA-A24 binding and HLA class II molecules. 4) WT1-TCR-CD4 positive T cells were induced to increase the cytotoxicity of WT1-TCR-CD8 positive CTL and leukemia cells. 5) WT1-TCR gene transfer for hematopoietic stem cells, HLA-A24 gene transfer for immunocompromised NSG gene transfer The results showed that WT1-specific HLA-A24-binding CTL was able to differentiate and proliferate in vivo