がんの免疫遺伝子治療への応用をめざしたEBウイルスベクターの開発

开发用于癌症免疫基因治疗的 EB 病毒载体

• 批准号: 15025201
• 负责人: 神田 輝
• 金额: $ 2.37万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15025201/
• 关键词: EBウイルス; ベクター; がん; 遺伝子治療; 大腸菌人工染色体; Bリンパ球; Muc1; WT1

研究代表者らが開発したAK-BACシステムは、約170キロベースのサイズを有するEBウイルスゲノムを大腸菌内の相同組換え法により改変し、組換えウイルス産生を行なう新しい方法である。AK-BACとはAkata細胞(バーキットリンパ腫細胞株)由来のEBVゲノム全長を有するBACクローンであり、大腸菌内で増殖可能であること、および大腸菌内における効率の良い相同組換え法により迅速かつ確実に改変できることが特徴である。本年度はこのシステムのさらなる改良を行なうとともに、がんの免疫遺伝子治療への応用に向けての第一歩を踏み出した。第一に、BACクローンDNAを細胞へ再導入してウイルス産生細胞を樹立する過程の効率化に成功した。第二に、BACシステムで作製・産生した組換えウイルスの力価の検討を行なった結果、リンパ球不死化能という点で、野生型EBウイルスと同様の力価を示すことを明らかにした。第三に任意の外来遺伝子をEBウイルスゲノム上に試験管内のライゲーション反応によりに組み込める新しい方法を確立した。第四に、この方法を用いて実際に腫瘍特異抗原Muc1およびWT1遺伝子を組み込んだ組換えウイルスゲノムを大腸菌内で作製し、これらのBACクローンを再導入したAkata細胞において、両者が蛋白質レベルで高発現することを確認した。さらにMuc1組込み組換えウイルスを産生し、Muc1を発現する不死化リンパ球細胞株(LCL)の樹立することに成功した。このようにAK-BACシステムは腫瘍特異抗原を高発現するLCLの樹立に有効であることから、こうしたLCLを抗原提示細胞として用いる細胞性免疫誘導への応用の可能性が示唆された。

The representative of the research conducted a wide range of AK-BAC training programs, about 170,000 yuan per month, and the same method was used to improve the quality of the bacteria, and the new method was used to improve the quality of the students. The origin of AK-BAC Akata cells (cell strains) is that the total length of EBV cells includes BAC cells, bacteria that may colonize in bacteria, bacteria that grow in bacteria, and bacteria that have the same rate of infection in bacteria. This year, we will try to improve the situation in the first place of this year. In the first place, BAC is responsible for the success of the process of health care in the DNA cell. Second, the BACKs were used in the health care system, the results were compared, the immortalization of the ball was affected, and the wild type EBV was used to show that the results were significant. Third, any foreign EB information is required to ensure that the new method is established. The fourth method is to use the specific antigen Muc1

项目成果

神田 輝: "EBウイルス(基礎・第4章)"診断と治療社. 8 (2003)

Teru Kanda：“EB 病毒（基础/第 4 章）”诊断和治疗出版 8（2003）。

Teru Kanda: "Production of high-titer EBV recombinants derived from Akata cells using a bacterial artificial chromosome system"J.Virol.. (in press). (2004)

Teru Kanda：“使用细菌人工染色体系统从 Akata 细胞中生产高滴度 EBV 重组体”J.Virol..（出版中）。